小桐子磷脂二酰甘油酰基转移酶(JcPDAT1) cDNA的克隆与功能鉴定

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1、中国油料作物学报２０１３，３５（２）：１２３－１３０ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＯｉｌＣｒｏｐＳｃｉｅｎｃｅｓｄｏｉ：１０．７５０５／ｊ．ｉｓｓｎ．１００７－９０８４．２０１３．０２．００３小桐子磷脂二酰甘油酰基转移酶（ＪｃＰＤＡＴ１）ｃＤＮＡ的克隆与功能鉴定１１，２１，２１１１徐荣华，邱丽俊，阳天泉，王如玲，田波，刘爱忠（１．中国科学院西双版纳热带植物园，热带植物资源开放实验室，云南昆明，６５０２２３；２．中国科学院研究生院，北京，１０００４９）摘要：使用简并ＰＣＲ结合ＲＡＣＥ技术从能源植物小桐子种子中克隆了一个ＰＤＡＴ基因的ｃＤＮＡ全长，命名为ＪｃＰＤＡＴ１（ＧｅｎＢａｎｋ登陆

2、号为ＨＱ８２７７９６）。ＪｃＰＤＡＴ１全长２８６９ｂｐ，包含一个长为２０１３ｂｐ的开放阅读框，编码６７０个氨基酸。多序列比对和进化分析表明该基因编码蛋白与其他植物ＰＤＡＴ高度同源，具有典型的ＰＤＡＴ结构域。ＲｅａｌｔｉｍｅＰＣＲ结果表明ＪｃＰＤＡＴ１在种子、叶和根里面都有表达，且在种子发育过程中大量表达。酵母互补实验证实该基因编码蛋白具有ＰＤＡＴ酶活性。在与酿酒酵母突变体Ｈ１２４６α的互补实验中发现，ＴＬＣ层析（薄层层析法）和尼罗红染色结果都显示ＪｃＰＤＡＴ１的表达使Ｈ１２４６α恢复合成ＴＡＧ，说明ＪｃＰＤＡＴ１具有ＰＤＡＴ的功能活性。关键词：小桐子；ＰＤＡＴ；简并ＰＣＲ；基因克隆；荧光

3、定量ＰＣＲ；酵母互补实验中图分类号：Ｑ７８６，Ｓ５６５．９０３文献标识码：Ａ文章编号：１００７－９０８４（２０１３）０２－０１２３－０８Ｃｌｏｎｉｎｇａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎｉｎｇｏｆｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄｓ：ｄｉａｃｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌａｃｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ（ＪｃＰＤＡＴ１）ｃＤＮＡｆｒｏｍＪａｔｒｏｐｈａｃｕｒｃａｓ１１，２１，２１１１ＸＵＲｏｎｇ－ｈｕａ，ＱＩＵＬｉ－ｊｕｎ，ＹＡＮＧＴｉａｎ－ｑｕａｎ，ＷＡＮＧＲｕ－ｌｉｎｇ，ＴＩＡＮＢｏ，ＬＩＵＡｉ－ｚｈｏｎｇ（１．ＸｉｓｈｕａｎｇｂａｎｎａＴｒｏｐｉｃａｌＢｏｔａｎｉｃａｌＧａｒｄｅｎ，ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆ

4、Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｋｕｎｍｉｎｇ６５０２２３，Ｃｈｉｎａ；２．ＧｒａｄｕａｔｅＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００４９，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＡｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅｃｏｎｓｅｒｖｅｄｒｅｇｉｏｎｏｆＰＤＡＴｇｅｎｅａｖａｉｌａｂｌｅｆｒｏｍＧｅｎＢａｎｋ，ｃＤＮＡｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆＰＤＡＴｇｅｎｅｆｒｏｍＪａｔｒｏｐｈａｃｕｒｃａｓＬ．ｗａｓｃｌｏｎｅｄｂｙｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅＰＣＲａｎｄＲＡＣＥ．ＴｈｅｇｅｎｅｗａｓｎａｍｅｄＪｃＰＤＡＴ１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎＨＱ８２７７９６）．Ｔｈｅｆｕｌｌ

5、ｌｅｎｇｔｈｃＤＮＡｏｆＪｃＰＤＡＴ１ｗａｓ２８６９ｂｐ，ｅｎｃｏｄｉｎｇ６７０ａｍｉｎｏａｃｉｄｓ．ＳｅｑｕｅｎｃｅａｌｉｇｎｍｅｎｔａｎｄｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃａｎａｌｙｓｉｓｒｅｖｅａｌｅｄｔｈａｔＪｃＰＤＡＴ１ｓｈａｒｅｄｈｉｇｈｈｏｍｏｌｏｇｙｗｉｔｈＰＤＡＴｆｒｏｍｏｔｈｅｒｐｌａｎｔｓ，ｓｕｃｈａｓＲｃＰＤＡＴ１（Ｒｉｃｉｎｕｓｃｏｍｍｕｎｉｓ，７５％）ａｎｄＡｔＰＤＡＴ１（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓｔｈａｌｉａｎａ，７４％）．ＴｈｅｓｅｑｕｅｎｃｅｈａｒｂｏｒｅｄｔｙｐｉｃａｌｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｄｏｍａｉｎｓｏｆＰＤＡＴ．ＲｅａｌｔｉｍｅＰＣＲｓｈｏｗｅｄｔｈａｔＪｃＰ

6、ＤＡＴ１ｗａｓｅｘｐｒｅｓｓｅｄｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｔｉｓｓｕｅｓｉｎｃｌｕｄｉｎｇｓｅｅｄｓ，ｌｅａｆ，ｒｏｏｔｔｉｐ，ａｎｄｗａｓｈｉｇｈｌｙｅｘｐｒｅｓｓｅｄｉｎｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇｓｅｅｄｓ，ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙａｔｔｈｅｏｉｌａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎｓｔａｇｅ．ＴＬＣａｎａｌｙｓｉｓａｎｄＮｉｌｅｒｅｄｓｔａｉｎｉｎｇｓｈｏｗｅｄｔｈａｔＪｃＰＤＡＴ１ｃｏｕｌｄｒｅｓｔｏｒｅｔｈｅＴＡＧｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓａｎｄａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎｉｎＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅｍｕｔａｎｔｓｔｒａｉｎＨ１２４６αｗｈｉｃｈｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔｔｈｅＪｃ

7、ＰＤＡＴ１ｐｏｓｓｅｓｓｅｄＰＤＡＴｅｎｚｙｍｅａｃｔｉｖｉｔｙ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｊａｔｒｏｐｈａｃｕｒｃａｓ；ＰＤＡＴ；ＤｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅＰＣＲ；Ｇｅｎｅｃｌｏｎｅ；ＲｅａｌｔｉｍｅＰＣＲ；Ｙｅａｓｔｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ油料植物通常在种子的胚乳或子叶中积累大量发展的要求，大量的植物油被用作生物柴油的生产。的三脂酰甘油（ｔｒｉａｃｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌ，ＴＡＧ）。这些储存油然而制约生物柴油发展的关键