海藻酸钠降解菌株的筛选

《海藻酸钠降解菌株的筛选》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、海藻酸钠降解菌株的筛选指导教师：姚子昂教授答辩人：许媛丽答辩内容研究背景选题依据和意义实验材料实验方法分析讨论致谢研究背景海藻酸钠---又名褐藻酸钠、褐藻胶，是一种来源于海洋褐藻的阴离子酸性多糖，是海带中提取的由α-L-1,4古罗糖醛酸(G)及β-D-1,4甘露糖醛酸(M)随机组合形成的线性高分子量聚合物，广泛应用于食品、医药等方面。研究背景由于海藻酸钠具有凝胶性强，粘度大，水溶性较差，不容易被吸收等特点，限制了海藻酸钠许多其他方面的应用，所以具有多种生理活性的褐藻胶多糖降解产物---褐藻胶寡糖(AlginateOligos

2、accharides，AOS)逐渐进入人们的视野。研究背景褐藻胶寡糖是一类新型生物制剂，具有可自然降解、不污染环境和无残留等优点。近年来，通过对褐藻胶寡糖生物活性的研究发现：褐藻胶寡糖具有整肠和解毒、降血糖血脂、抗凝血、抗炎、免疫调节等作用。因此通过各种降解方法制备的褐藻胶寡糖在糖化学、糖生物学、糖工程及糖类药物研究领域具重要的研究价值。选题依据和意义目前褐藻胶寡糖的获取方法主要应用酶解法，它是一种条件温和、可控性强和特异性高的生物降解方法,在寡糖制备各方面明显优于化学和物理降解。选题依据和意义本实验利用微生物作用于海藻酸钠

3、得到降解酶并最终获得寡糖，通过诱导筛选出产酶量高、酶活性强的优势菌株，测定其生长曲线和酶活曲线,对其发酵条件进行优化研究。为大规模生产海藻酸钠裂解酶奠定理论基础，对海藻胶寡糖的应用具有推动作用，并且对进一步研究海洋寡糖提供研究方向。实验材料腐烂的海带，取自大连开发区海贝广场海域实验方法一.筛选菌株1样品的处理用无菌生理盐水系列稀释海带样品，取合适浓度涂布，30℃，恒温培养72h。2初筛以海藻酸钠作为唯一碳源分离和筛选海藻酸钠降解菌，30℃恒温培养72h。3复筛将初筛得到菌株先接到斜面培养基活化，再挑取2环接入复筛培养基中30

4、℃，150r/min，培养24h，再进行测定。二.测定高产菌株生长曲线和酶活曲线1.生长曲线测定每隔3h从种子液中取样按比浊法测定种子液的生物量（以OD540nm表示）。2.酶活曲线测定采用DNS法，1ml粗酶液和1ml海藻酸钠底物40℃反应30min，加入2mlDNS沸水浴3min，冷却，测540nm处OD值。实验方法三.产酶条件的研究1.碳源种类发酵培养基分别以琼胶、淀粉、海藻酸钠和卡拉胶作为唯一碳源，浓度为0.2%，其他物质含量不变。2.碳源浓度在发酵培养基中分别添加浓度为0.1%、0.3%、0.5%、0.7%、0.9

5、%的海藻酸钠，其他物质含量不变。3.氯化钠浓度在发酵培养基中分别添加浓度为0.5%、1.0%、1.5%、2.0%和2.5%的氯化钠，接其他物质含量不变。实验方法4.pH在发酵培养基中，分别按6.0、6.4、6.8、7.2、7.6调节培养基的pH，接其他物质含量不变。5.蛋白胨浓度在发酵培养基中分别添加浓度为0.1%、0.3%、0.5%和0.7%的蛋白胨，接其他物质含量不变。实验结果---菌株筛选本实验初筛后分离得到10多株能够产海藻胶裂解酶的细菌，通过比较菌落周围透明圈与菌落的直径比值以及透明圈的透明度，选择菌株11为后期的

6、实验菌。实验结果---生长曲线和酶活曲线由图可以看出，菌株11在3h后开始进入对数生长期，并于30h达到最大生物量。随后，随培养时间延长，该菌很快开始衰亡。实验结果---生长曲线和酶活曲线由图4可以看出，菌株11的酶活曲线在开时3h后呈增长趋势，并在27h达到最大活性，随后，随培养时间延长，酶的活力开始降低。菌株11的酶活曲线与生长曲线基本吻合，即菌株11生长和产酶基本一致。实验结果---碳源种类对菌株产酶影响由图可以看出,分别以相同浓度的琼胶、卡拉胶、海藻酸钠和淀粉作为发酵培养的唯一碳源时，菌株11在以海藻酸钠为唯一碳源时

7、产酶活力高于其他，表明菌株11所产的海藻胶酶为诱导酶。实验结果---碳源浓度对菌株产酶影响由图可以看出，在培养基中海藻酸钠浓度为0.7％时，菌株11的产酶活力最高，因此选择海藻酸钠浓度为0.7％的培养基为最适培养基。实验结果--氯化钠浓度对菌株产酶影响由图可以看出，在培养基中氯化钠浓度为2.5％时，菌株11的产酶活力较高于其他浓度，因此选择氯化钠浓度为2.5％的培养基为最适培养基。实验结果---pH对菌株产酶影响由图可以看出，在培养基中的pH为7.2时，菌株11的产酶活力明显高于其他pH，因此选择pH7.2为最适pH。实验结

8、果--蛋白胨浓度对菌株产酶影响由图可以看出，在培养基中蛋白胨浓度为0.3％时，菌株11的产酶活力最高，因此选择蛋白胨浓度0.3％的培养基为最适培养基。讨论分析1.从腐烂的海带上筛选出得到10多株能够产海藻胶裂解酶的细菌，通过比较菌落周围透明圈与菌落的直径比值以及透明圈的透明度，选择菌株11