gb15193.11-2003 果蝇伴性隐性致死试验

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1、ICS07.100C53中华人民共和国国家标准GB15193.11-2003代替GB15193.11-1994果蝇伴性隐性致死试验Sex-linkedrecessivelethaltest2003-09-24发布2004-05-01实施中中华人民共和国卫生部发布国国家标准化管理委员会GB15193.11-2003P1i吕本标准全文强制。本标准代替GB15193.11-1994《果蝇伴性隐性致死实验》。本标准与GB15193.11-1994相IL主要修改如下:—在“范围”中增加了:食品生产、加工、保藏、运输和销售过程中所涉及的可能对健康造成危害的化学、生物和物理因素，检验对象包括食品添加剂

2、(含营养强化剂)、食品新资源及其成分、新资源食品、辐照食品、食品容器与包装材料、食品工具、设备、洗涤剂、消毒剂、农药残留、兽药残留、食品工业用微生物等;—将“剂量及分组”改为与“操作步骤”并列的一章;—在剂量及分组中，增加了“如果受试物毒性较小，受试物加人饲料的最大剂量可占饲料的500阳性对照物可用甲基磺酸乙醋、甲基磺酸甲醋,N一亚硝基二甲胺”;—在“操作步骤”中，增加了“受试物配制”。自本标准实施之日起，GB15193.11-1994同时废止。本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。本标准起草单位:浙江医科大学、上海铁道医学院。本标准主要起草人:徐惟安、叶恩赐、祝慧娟、历曙光。本标准于

3、1994年首次发布，本次为第一次修订。GB15193.11-2003果蝇伴性隐性致死试验范围本标准规定了果蝇伴性隐性致死试验的基本技术要求本标准适用于评价食品生产、加工、保藏、运输和销售过程中所涉及的可能对健康造成危害的化学、生物和物理因素的遗传毒性，检验对象包括食品添加剂(含营养强化剂)、食品新资源及其成分、新资源食品、辐照食品、食品容器与包装材料、食品工具、设备、洗涤剂、消毒剂、农药残留、兽药残留、食品工业用微生物等2原理2.1隐性基因在伴性遗传中的交叉遗传性，即雄蝇的X染色体传给F代雌蝇又通过F,代传给F,代雄蝇2.2位于X染色体上的隐性基因能在半合型情况下于雄蝇中表现出来据此，利

4、用眼色性状由X染色体上的基因决定，并与X染色体的遗传相关联的特征来作为观察在X染色体上基因突变的标记，故以野生型雄蝇(红色圆眼，正常蝇)染毒，与Basc(Muller-5)雌蝇(淡杏色棒眼，在两个X染色体上各带一个倒位以防止F,代把处理过的父系X染色体和母系X染色体互换)交配，如雄蝇经受试物处理后，在X染色体上的基因发生隐性致死，则可通过上述两点遗传规则于F:代的雄蝇中表现出来，并籍眼色性状为标记来判断试验的结果。即根据孟德尔分类反应产生四种不同表型的F。代，有隐性致死时在F:代中没有红色圆眼的雄蝇3仪器与试剂3.1仪器与器材设备电热恒温干燥箱、生化培养箱、立体解剖显微镜、放大镜、空调机

5、、麻醉瓶、牛奶瓶、大小玻璃试管(3cmX8cm,2cmX9cm)、试管盘及架、白瓷板、海绵垫、毛笔、海绵塞3.2试剂乙醚,75%乙醇、丙酮、吐温。3.3'培养基的制备大小试管和海绵塞洗净后于1200C2h干燥消毒后备用。3.3.1蔗糖26g、酵母粉4g，加水150ml。3.3.2玉米粉34g,酵母粉4g，加水150ml3.3.3步骤:按3.3.1煮沸溶解后再按3.3.2倒人混匀、煮沸，然后加丙酸2mL，搅匀，分装于试管内，备用4实验动物果蝇。雄蝇用3天一4天龄的野生型黑腹果蝇(Drosophilamelanoguster),雌蝇用Base(Muller-5)品系3天一5天龄的处女蝇5剂量

6、及分组按常规方法求出LC,或LD值。然后按1/2LC。或LD5。为大剂量，1/51,D。一1/l0LD。为小剂量，另设阴性(或溶剂)及阳性(2mmol/LMMS)对照组。如果受试物毒性较小，受试物加人饲料的最大79CB15193.11-2003剂量可占饲料的5%。阳性对照物可用甲基磺酸乙醋、甲基磺酸甲醋,N一亚硝基二甲胺。6操作步骤6.1受试物配制一般受试物应溶解在水中，如受试物不溶于水，可用食用油、医用淀粉、狡甲基纤维素等配成乳化液或悬浮液，然后再在给样前用水或生理盐水稀释。避免用二甲基亚矾作为介质。受试物应于灌胃前新鲜配制，除非有资料表明以溶液(或悬浊液、乳浊液等)保存具有稳定性。6

7、.2处女蝇的收集开始羽化后，清除管内所有成蝇，然后在6h--12h内收集的雌蝇即为处女蝇。将处女蝇放人新试管，一只管中不超过25只，以免过分拥挤。6.3接触受试物受试物接触方法常用溶液饲养。受试物溶解后用1%-5%的蔗糖水稀释成不同浓度，试管内放入一团手纸，加人1MI受试液使纸充分湿透，放入经饥饿4h的雄蝇进行喂饲，新配制的培养基冷却到55℃时，倒人受试物，快速磁搅拌2min，接触受试物时间1天一3天。6.4交配程序及方法为检测受试