gbt 27822-2011 化学品 黑腹果蝇伴性隐性致死试验方法

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1、ICS13．300；11．100A80园雷中华人民共和国国家标准GB／T27822--2011化学品黑腹果蝇伴性隐性致死试验方法Chemicals--Testmethodofsex-linkedrecessivelethalinDrosophilaMelanogaster2011-12-30发布2012-08-01实施中国国家标准化管理委员会仪19宰瞀鹃紫瓣訾糌瞥星发布1范围化学品黑腹果蝇伴性隐性致死试验方法GB／T27822--201本标准规定了黑腹果蝇伴性隐性致死试验的术语和定义、参考物质、试验基本原则、试验方法、试验数据

2、和报告。本标准适用于检测化学品的黑腹果蝇伴性隐性致死试验。2术语和定义2．12．22．3下列术语和定义适用于本文件。致死突变lethalmutation基因组的一种改变，当这组基因表达时引起携带者死亡。隐性突变recessivemutation在纯合子或半合子条件下表达的一种基因组的改变。伴性基因sex-linkedgenes存在于性染色体(x或Y)上的基因，在本方法中只指位于x染色体上的基因。3参考物质可用作阳性对照的物质有：甲磺酸乙酯(ethylmethanesulphonate)，N一亚硝基二甲胺(N-nitroso-d

3、imethylamine)。4试验基本原则伴性隐性致死试验(sex-linkedrecessiveletha，SLRL)利用黑腹果蝇(DrosophilaMelanogaster)检测在昆虫生殖细胞系中的突变发生率，包括点突变和小的缺失。本方法是一种正向突变分析方法，能够筛选在x染色体上800基因位点的突变，即所有x染色体基因位点的80％。X染色体约占整个基因组的1／5E“。黑腹果蝇x染色体的突变在携带突变基因的雄性个体中有典型的表型表现。当半合子发生致死性突变时，可通过杂合子雌性个体正常繁殖的两类雄性子代中的一类缺失加以推断

4、。SLRL试验利用了染色体特殊性标记和排列的特性。5试验方法5．1试验操作概述野生型雄性黑腹果蝇染毒后与合适的雌性黑腹果蝇交配。交配得到的雌蝇再与同代的雄性1GB／T27822--20”黑腹果蝇单独进行交配，在他们的下一代中记录每个单独交配后代中的野生型雄性黑腹果蝇的表型。野生型雄性黑腹果蝇表型的缺失显示P1雄性黑腹果蝇的生殖细胞已经发生了性伴隐性致死性突变。5．2必备条件本试验应必备条件如下：——固态、液态、蒸气或气态的受试样品；——受试样品的化学识别号码；——化学品的纯度(杂质)；——溶解性；——熔点／沸点；——酸碱度(可

5、测时)；——蒸汽压(如已知)。5．3实验动物5．3．1动物种属选用野生型雄性和Muller-5雌性黑腹果蝇。其他有适合标记的具有多重反向x染色体的雌性品系也可以使用。5．3．2受试物受试物应溶解在水中。不溶于水的物质可溶解于或悬浮于合适的赋形剂中(如：乙醇和土温60或80的混合溶液中)，然后在给样前用水或盐水稀释。避免用二甲基亚砜(dimethylsulfoxide，DMSO)作为赋形剂。5．4试验条件5．4．1给药途径可通过口服、注射或暴露于气体或蒸气染毒。经口喂饲的受试物应溶解在蔗糖水中。必要时受试物可溶解在0．7％的Na

6、Cl溶液中，注射到胸腔或腹腔中。5．4．2剂量水平对受试物突变进行初步评价时，测试一个最大耐受剂量或者是可能达到的最高剂量。如果为了测定剂量一反应关系时，至少需要设三个剂量组。5．4．3对照试验应设置阴性对照组(赋形剂)和阳性对照组。可用于作为阳性对照的物质有：甲磺酸乙酯；N一亚硝基二甲胺。如果有适当的实验室的历史对照数据，可不设对照组。5．5试验步骤为检测受试物对生殖细胞不同阶段敏感性，将雄蝇(出生3天龄～5天龄)在接触受试物以后分别相隔2d～3d与Muller-5品系或其他有合适标记(具有多重反向x染色体)品系的处女蝇交2

7、GB／T27822--2011配，这些雌性的后代用于评价受试物对成熟精子、中晚期精细胞、早期精细胞、精母细胞和精原细胞的致死效应。每一指管以一只经处理过的雄蝇按上述程序处女蝇单独交配(即：每个管内放一个雌蝇)。再以所产F1代按雄雌1：1或1：2进行F1～F2交配，12d～14d后观察F2代，记录子代的致死数。如果一管果蝇中出现的是亲代的x基因中带有致死因子的F代雌蝇(即未见有携带上述染色体的雄蝇)，那么应对那些有相同基因型雌蝇的雌性后代进行检测，以确认这种致死性是否会在下一代中重现。试验的设计应具有预定的敏感性与测定的能力。每

8、组的果蝇数量应符合试验设计的需要。通过阴性对照组观察自发突变频数，当试验组的突变率接近对照组突变率时，应重复试验进行验证。试验结果应在独立的重复实验中加以证实。6试验数据和报告6．1结果整理试验数据应以表格的形式显示以下信息：检测的x染色体数目，不育雄性个体的数目以及各剂量组