黄瓜几种主要病害的ELISA检测研究

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1、福建农林大学硕士学位论文黄瓜几种主要病害的ELISA检测研究姓名：李龙生申请学位级别：硕士专业：植物病理学指导教师：唐乐尘;李宝聚20060401福建农林太学硕士学位论文摘要黄瓜角斑瘸、黑星病、炭疽病是我国黄瓜生产上重要病害，各地发生普遍，常年为害，严重影响蔬菜生产安全。黄瓜红粉病、褐斑病是近年来北方地区新发生病害，蔓延加剧的趋势昭显。瘸害诊断是病害防治的关键，常规诊断方法存在经验性强、时有误诊发生的特点。有鉴于此，本研究目的在于建立了一套快速、准确、灵敏的检测方法，用于黄瓜角斑病、黑星病、炭疽瘸、红粉病和褐斑病的诊断，为病害防治提供依据。经过对ELISA检测黄

2、瓜病害方法的研究与验证，确定了病原真菌和细菌的抗原制备方法，分析了2种抗血清纯化方法的特点和效果，确立了ELISA检测病害的质量控制参数，证实了ELISA用于痛害诊断的可行性，为农业病害诊断试剂盒的推广应用提供参考，利用液体培养基培养病原真菌(黄瓜黑星病萄、炭疽病菌、红粉病菌、褐斑病菌)，解决了一些病菌在固体培养基上产生菌丝量少的困扰，为大规模提取菌丝蛋白作抗原建立了可行的模式；采用NA培养基培养黄瓜角斑病菌，灭活后离心洗涤制备菌体抗原。该法制备抗原较提取病菌某一组分作抗原简单，成本低，而且免疫效果能满足病害检测要求，抗血清终点效价都超过20，000。选取报道的

3、4种常用包被液分别包被抗原进入ELISA程序，研究了各种包被液对检测效果的影响。证实以O05moVL、pri9．6的碳酸盐缓冲液包被抗原效果最好，对大多数试剂盒适用。比较了硫酸铵分步盐析和冷乙醇沉淀2种抗体纯化方法，证实硫酸铵盐析在纯化IgG抗体上的优势。利用改良过碘酸钠法对初步纯化抗体进行I-IR．P标记，结果表明该法可行t省略了通行的抗血清盐析和标记后进一步纯化的步骤，但对效果会有一定影响。方阵滴定确定了各种病菌所对应抗体最适工作浓度，抗体工作浓度在1^．20pg／mL之间。模拟田问检测，表明研制的ELISA试剂盒检测灵敏度在ng水平(菌丝蛋白)，分别为黑星

4、病菌小于500ng／mL、炭疽病菌S0ng／mL、红粉病菌250ng／rnL、褐斑病菌50ng／mL，对角斑病菌的检测灵敏度为4×104CFUIng．；准确性好，模拟田间检测准确福建农林大学硕士学位论文率分别为：黑星病菌85％、炭疽病菌95％、红粉病菌95％、褐斑病菌95％、角斑病菌90％。本研究研制的ELISA检测试剂盒为蔬菜病害诊断提供快速、灵敏、可靠的方法，进而为病害防治提供有力的技术支持。关键词：黄瓜；蔬菜病害；病害诊断；ELISA；试剂盒II福建农林大学硕士学位论文StudyonDetectionofMainDiseasesonCucumberbyEL

5、ISAABSTRACTCucumberAngularLeafSpot，CucumberScabandCucumberAnthracnosearethemaindiseasesinthecucumberproduction．Theoccurrenceofthesediseasesisverywidespreadallyeararoundandseriouslyaffectssafetyofvegetableproduction．CucumberPinkMoldRotandCucumberCorynesporaTargetLeafSpothaveoccurredre

6、centlyintheNorthChma．Theyspreadfast．Thediagnosisofdiseasesisthekeyme嬲uretocontroldisease．TheregulardiagnosisMethodshavethedisadvantagesofdependonexperienceanddiagnosis．Tosolvethisproblem，weaimtosetupaseriesoffast，accurateandsensitivediagnosismethodsforthedetectionofthesefivediseases．

7、AfterresearchonthedetectionofcucumberaiseasesbyELISA，wefoundthemethodstopreparetheantigensofpathogenicfungiandbacteria，comparedthecharacteristicsandeffectoftwodifferentmethods(withfungiandbaeteria)ofantibodypreparation．ThequalitycontrolparametersofdiseasedetectionbyELISAweredetermine

8、d．Thefactspr