黄瓜几种主要病害的ELISA检测研究

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时间:2019-05-15

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1、福建农林大学硕士学位论文黄瓜几种主要病害的ELISA检测研究姓名:李龙生申请学位级别:硕士专业:植物病理学指导教师:唐乐尘;李宝聚20060401福建农林太学硕士学位论文摘要黄瓜角斑瘸、黑星病、炭疽病是我国黄瓜生产上重要病害,各地发生普遍,常年为害,严重影响蔬菜生产安全。黄瓜红粉病、褐斑病是近年来北方地区新发生病害,蔓延加剧的趋势昭显。瘸害诊断是病害防治的关键,常规诊断方法存在经验性强、时有误诊发生的特点。有鉴于此,本研究目的在于建立了一套快速、准确、灵敏的检测方法,用于黄瓜角斑病、黑星病、炭疽瘸、红粉病和褐斑病的诊断,为病害防治提供依据。经过对ELISA检测黄

2、瓜病害方法的研究与验证,确定了病原真菌和细菌的抗原制备方法,分析了2种抗血清纯化方法的特点和效果,确立了ELISA检测病害的质量控制参数,证实了ELISA用于痛害诊断的可行性,为农业病害诊断试剂盒的推广应用提供参考,利用液体培养基培养病原真菌(黄瓜黑星病萄、炭疽病菌、红粉病菌、褐斑病菌),解决了一些病菌在固体培养基上产生菌丝量少的困扰,为大规模提取菌丝蛋白作抗原建立了可行的模式;采用NA培养基培养黄瓜角斑病菌,灭活后离心洗涤制备菌体抗原。该法制备抗原较提取病菌某一组分作抗原简单,成本低,而且免疫效果能满足病害检测要求,抗血清终点效价都超过20,000。选取报道的

3、4种常用包被液分别包被抗原进入ELISA程序,研究了各种包被液对检测效果的影响。证实以O05moVL、pri9.6的碳酸盐缓冲液包被抗原效果最好,对大多数试剂盒适用。比较了硫酸铵分步盐析和冷乙醇沉淀2种抗体纯化方法,证实硫酸铵盐析在纯化IgG抗体上的优势。利用改良过碘酸钠法对初步纯化抗体进行I-IR.P标记,结果表明该法可行t省略了通行的抗血清盐析和标记后进一步纯化的步骤,但对效果会有一定影响。方阵滴定确定了各种病菌所对应抗体最适工作浓度,抗体工作浓度在1^.20pg/mL之间。模拟田问检测,表明研制的ELISA试剂盒检测灵敏度在ng水平(菌丝蛋白),分别为黑星

4、病菌小于500ng/mL、炭疽病菌S0ng/mL、红粉病菌250ng/rnL、褐斑病菌50ng/mL,对角斑病菌的检测灵敏度为4×104CFUIng.;准确性好,模拟田间检测准确福建农林大学硕士学位论文率分别为:黑星病菌85%、炭疽病菌95%、红粉病菌95%、褐斑病菌95%、角斑病菌90%。本研究研制的ELISA检测试剂盒为蔬菜病害诊断提供快速、灵敏、可靠的方法,进而为病害防治提供有力的技术支持。关键词:黄瓜;蔬菜病害;病害诊断;ELISA;试剂盒II福建农林大学硕士学位论文StudyonDetectionofMainDiseasesonCucumberbyEL

5、ISAABSTRACTCucumberAngularLeafSpot,CucumberScabandCucumberAnthracnosearethemaindiseasesinthecucumberproduction.Theoccurrenceofthesediseasesisverywidespreadallyeararoundandseriouslyaffectssafetyofvegetableproduction.CucumberPinkMoldRotandCucumberCorynesporaTargetLeafSpothaveoccurredre

6、centlyintheNorthChma.Theyspreadfast.Thediagnosisofdiseasesisthekeyme嬲uretocontroldisease.TheregulardiagnosisMethodshavethedisadvantagesofdependonexperienceanddiagnosis.Tosolvethisproblem,weaimtosetupaseriesoffast,accurateandsensitivediagnosismethodsforthedetectionofthesefivediseases.

7、AfterresearchonthedetectionofcucumberaiseasesbyELISA,wefoundthemethodstopreparetheantigensofpathogenicfungiandbacteria,comparedthecharacteristicsandeffectoftwodifferentmethods(withfungiandbaeteria)ofantibodypreparation.ThequalitycontrolparametersofdiseasedetectionbyELISAweredetermine

8、d.Thefactspr

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