酶解干酪素生产酪蛋白糖巨肽工艺研究

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1、分类号：TQ25密级：(秘密、机密、绝密)学校代码：10057研究生学号：08841005酶解干酪素生产酪蛋白糖巨肽工艺研究StudyonTechnologyofCaseinGlycomacropeptideProductionbyEnzymolysisCasein专业名称：指导教师姓名：研究生姓名：申请学位级别：论文提交H期：论文课题来源：学位授予单位：生物化学与分子生物学王艳萍教授赵运星理学硕士2010年12月圈家项目天津科技大学天津科技大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在

2、导师的指导下独立进行研究工作所取得的成果。除文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包括任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果内容，也不包括为获得天津科技大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。对本文研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。作者签名：赵逗菇日期：anl年3月‘日知识产权和专利权保护声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师具体指导下并得到相关研究经费支持下完成的，其数据和研究成果归属于导师和作者本人，知识产权单位属天津科

3、技大学；所涉及的创造性发明的专利权及使用权完全归天津科技大学所有。本人保证毕业后，以本论文数据和资料发表论文或使用论文工作成果时署名第一单位仍然为天津科技大学。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。作者签名：．熟适屈日期：a订J年≥月6日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，同意公布论文的全部或部分内容，允许论文被查阅和借阅。本人授权天津科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行

4、检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密ll(请在方框内打“√”)，在年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密l当(请在方框内打“√”)。作者签名：k-黾膨日期：国07f年易月石日导师签名：卅蠕日期：8口『1年乌月Z日摘要酪蛋白巨肽(CaseinGlycomacropeptide，CGMP)是一一种由凝乳酶(或胃蛋白酶)水解酪蛋白中K-casein的Phel05．Metl06的肽键得到的具有64个氨基酸残基的短肽。CGMP具有多种生物活性。目前酪蛋白糖巨肽的生产主要是从

5、乳清中提取，由于乳清中乳糖、乳清蛋白等的存在，使大规模生产CGMP存在一定的技术困难。本文以干酪素为原料，从干酪素的溶解、凝乳酶酶解条件、CGMP的初提、精制以及产品的成分测定等方面，研究了凝乳酶酶解干酪素制备CGMP的工艺。通过研究氢氧化钠浓度，干酪素溶解量与CGMP得率的关系，得到最佳的溶解条件为：氢氧化钠浓度0．16mol／L，干酪素的溶解量为69／100mL。结合单因素实验结果，采用Minitab软件进行实验设计，对影响酶解的主要因素进行了筛选，结果表明酶解的时间、温度、pH、酶与底物比是

6、影响酶解的主因素。根据Minitab的分析结果，采用DesignExpert软件中响应面设计及分析对酶解主因素进行了优化，得到的最佳酶解条件为：酶解时间80min、酶解温度42．5℃、酶解pH6．28、酶与底物比270U／g。此时酪蛋白糖巨肽的得率为17．91mg／g干酪素。在酪蛋白糖巨肽的分离纯化部分，考察了不同絮凝剂在CGMP初提中的效果、絮凝法与等电点沉淀法的优劣、超滤的最佳条件、离子交换树脂的最佳条件等。结果表明壳聚糖、硫酸铝钾、硫酸铝等三种絮凝剂的絮凝效果较好，但不如等电点沉淀法；超滤的

7、单因素实验表明，超滤的最佳条件是：压力0．276Mpa、转速400r／min、样品pH7．5。筛选的阴离子交换树脂D280对CGMP的分离效果较好，适合工业化生产。通过离子交换树脂的吸附及洗脱条件研究，确立其最适的分离条件为：进样体积1／10BV(柱床体积)，样品pH7．5，采用0．1mol／L、0．5mol／L、1．0mol／L的NaCl溶液梯度洗脱，洗脱速度1BV／h，各梯度沈脱体积2BV，CGMP被洗脱的NaCI溶液浓度为0．5mol／L。SDS．PAGE检测结果表明，洗脱液中CGMP的条带

8、单一，洗脱效果较好。经过喷雾干燥法制得3种彳i同纯度的CGMP样品，根据国家标准，测定样品相关理化指标。结果表明CGMP样品的糖基化度和纯度较高，符合产品的卫生指标。关键词：酪蛋白糖巨肽；絮凝；分离纯化；离子交换ABSTRACTCaseinGlycomacropeptide(CGMP)isproducedbychymosin(orpepsin)cleavagingofK—caseinbetweenPhel05-Metl06thatcontains64aminoacid．CGMPha