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1、青牛胆急性毒性实验性研究作者:姜月霞,张俊清,刘明生【摘要】目的:采用海南青牛胆茎提取物,通过对小鼠急性毒性实验及安全性研究,作出初步评价。方法:取KM小鼠50只,雌、雄各半,10只做预试验,另40只按同性别随机分为雌、雄空白对照组(蒸馏水组)和药物组,每组各20只。对小鼠空腹经口灌胃给予青牛胆提取物分别为人临床用量的200倍、400倍和600倍剂量,观察小鼠出现的毒性反应及有无死亡。结果:观察7d,未见小鼠死亡,所有受试小鼠毛色光洁,活动、饮食和二便正常,两组经t检验,差异无统计学意义(P&g
2、t;0.05)。结论:海南青牛胆未见有明显毒性反应,表明本品安全性较高。【关键词】青牛胆;提取物;急性毒性实验;海南省 [ABSTRACT]Objective:Toevaluatethesafetyoftinosporahainanensis.Methods:200,400and600timesofclinicaldosageoftinosporahainanensisextractionwereadministeredtoratsbyintragastricadministration.Ac
3、utetoxicityreactionsanddeathwererecorded.Results:During7daysofadministration,allratsate,anddischargednormally,keptnormalfigureandmovement.Nodeathwasobserved.There6isnosignificantdifferencebetweenthedispersingliverandimprovingeyesightandthedistilledw
4、atergroup(P>0.05).Conclusion:Noobvioustoxicityreactionswereobservedandtinosporahainanensisisprettysafe. [KEYWORDS]Tinosporahainanensis;Extraction;Acutetoxicitytest;HainanProvince 海南青牛胆(TinosporahainanensisH.S.LoetZ.X.Li)系防己科青牛胆属植物,为海南特有种[1],在民间广
5、泛用以治疗关节疼痛和筋骨损伤。具有镇痛、松筋、抗炎和抗菌的功效[2]。近年来海南青牛胆药效物质的研究已取得重大进展。通过经典柱色谱的分离,结合体外细胞学实验研究,确定了该复方有效部位为植物总甾酮类化合物,既可显著地抑制钙的流失和促进成骨细胞的形成,亦可改善因钙流失或成骨细胞合成受阻而造成的骨质疏松[3]。为进一步挖掘海南青牛胆的药用价值,确保其安全性,根据中药临床前毒理学评价的指导原则,笔者对海南青牛胆提物进行了急性毒性试验研究,为开发利用海南青牛胆资源提供了科学根据。 1材料与方法 1.1
6、实验材料6 1.1.1药物来源实验用药为醇提海南青牛胆。以95%乙醇回流3次,合并提取液后浓缩,产率为20.13%。 1.1.2动物KM小鼠50只,体重18~22g,雌雄各半,由长沙市开福区中创实验动物科技服务部提供。湖南省实验动物质量合格证第002478号。 1.2方法 1.2.1预实验剂量确定为探讨其急性毒性,在预试灌胃测不出LD50的情况下,进行了小鼠最大耐受试验最低剂量组定为6g/kg,用10只小鼠(雌雄各半)做预试,经观察后,小鼠无一例死亡,也未出现任何中毒现象。故此剂量为安全
7、剂量,经计算可得,此剂量为成人日用量的100倍。将最大浓度溶液(能够用灌胃针头注射为标准)的浓度定为最高剂量组36g/kg。 1.2.2急性毒性实验取KM小鼠40只,雌雄各半,随机分成空白组与药物组(按同性别分组),采用空腹经口灌胃给药,各组药物浓度不同,灌胃体积相同,均为每只给药0.5mL,一次性给药,灌胃前禁食12h,但不禁水。蒸馏水作为空白对照。每日3次给药,间隔86h,然后观察小鼠的死亡、中毒及活动情况,并记录小鼠的体重、饮食变化。连续观察1周。 1.2.3观察指标给药后密切观察12
8、h,并详细记录观察结果,以后每天上午8~9时及下午3~4时各观察1h,并记录观察结果,对其中死亡的动物立即进行尸体解剖检查。连续观察7d,神经系统方面:(1)行为及反应(包括不正常叫声、烦躁、不安等);(2)运动(包括肌肉抽搐、僵硬、强迫运动等);(3)瞳孔及分泌物(瞳孔有无缩小或放大、流泪等);(4)呼吸及心血管:呼吸急促或过缓、鼻分泌、触心前区心率快慢等;(5)胃肠方面:腹部胀气或收缩、大便坚硬或湿等;(6)泌尿生殖系统:阴唇、乳腺肿胀、会阴部肮脏;(7)皮肤和毛:颜色、完整性、有否充血、发