抗伊氏锥虫兔源“抗体库”效果研究

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1、内蒙古农业大学硕士学位论文抗伊氏锥虫兔源“抗体库”效果研究姓名：袁志波申请学位级别：硕士专业：预防兽医学指导教师：郑润宽;索勋2003.5.1摘要本实验由伊氏锥虫云南水牛单克隆株Ynl’atl开始顺序感染5只兔，观察伊氏锥虫在兔体内的抗原变异情况，进一步揭示伊氏锥虫抗原变异规律。随后根据所获得的抗原变异体(VATvariableantigentype)，建立抗伊氏锥虫兔血清抗体库一原混血清库、虫体血清库、VSG(variablesurfaceglycoprotein)血清库，并对抗体库的抗虫效果进行检测a／首先进行的是伊氏锥虫一个单克隆株在5只兔体内连续抗原变异的研究。／用

2、伊氏锥虫云南水牛单克隆株YnTatl感染兔，感染后30天内，每3天从兔血中分离锥虫并单虫克隆，最后一个未单虫克隆的虫株感染另一只兔，重复以上操作，这样顺序感染5只兔子，共获得50个单克隆锥虫种群(Tp)，经间接免疫荧光和ABC酶标试验鉴定共为20个抗原性互不相同的抗原变异体(VATs)。用国际命名法命名为YnTatl．1、YnTatl．2、一Y砌k1．20，从实验结果中未见这20个VATs在5只兔体内按照某种特定规律变异，但是其中有15个优势VATs在连续感染中多次重复，这印证了某些VATs倾向于在感染早期出现的规律(Gray1965等)。我们分离到的VATs只有20个并且

3、优势VATs多次重复，这说明在伊氏锥虫感染兔，波动的VATs局限在一定范围之内。其中三个克隆群体几乎与所有抗血清有交叉反应，推断它们为这一克隆株的“代表变体”。j户—一随后进行的是抗伊氏锥虫兔血清抗体库抗虫效果检测试验，通过三种不同方法分别建立抗伊氏锥虫兔原混血清库、虫体血清库、VSG血清库，sD大自鼠分12组对三个抗体库的效果进行检测。结果表明抗伊氏锥虫兔原混血清库的抗虫效果最好，虫体血清库次之，VSG血清库与空白血清未见明显保护。关键词：伊氏锥虫；抗原变异；vAT；VsG；抗体库，獭《尝?StudyofAnti·trypanosomaevansiAntibodyBank

4、DerivedfromRabbitABSTRAClInordertofindoutregularityofantigenicvareation，aclonedpopulationofTrypanosomaevansistockYnTatlwasinfectedsequentiallyto5NewZealandrabbitsduring150days．Competingtheablityofanti—trypanosomaev．ansibetween3differentantibodybankderivedfromrabbi峰，settingupbydifferentmean

5、s．AtfirsLstudyonantigenicvariationintrypanosomaevansifromStclonalstockinrabbitWaScarriedout．ArabbitwasinfectedwithaclonedYnTatl，bloodwascollectingfromtherabbitevery3daysafterinfectionwithin30days，10clonaltrypanosomepopulationsweregotten，infectinganewrabbitbythelastnon-clonedtrypanosomepopu

6、lation．Repeatedaboveall，thusinfected5rabbitssequentially．TwentydifferentVATs(variantantigentype)weremonitoredandcharacterizedfromthosefi姆mono-clonalpopulationsbyindirectimmunofluorescencetest(IFT)andavidinbiotinenzymeimmunoassay(ABC-EIA)．TheyweredesignatedasYnTat1．1．YnTat1．2BeTat1．3．．⋯．Bet

7、tt1．19．BeT{lt1．20．PurifiedYnTatltrypanosomeswerebrokenbyN·-tosyl-·lysinechloromethylketone(TLCK)andcentrifugatedbyhighgtoformsolubleproteins．ThesolubleproteinswerechromatographedOnaDE-52column．ThematerialinthefirstpeakconstitutedthepurifiedVSG．Themolecularweig