α乙酰乳酸脱羧酶高产菌株的选育与发酵条件优化研究

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1、西南农业大学硕士学位论文α-乙酰乳酸脱羧酶高产菌株的选育与发酵条件优化研究姓名：张健申请学位级别：硕士专业：农产品贮藏与加工指导教师：张惟广2003.5.1西南农业大学二零霉三届硕士学位论文摘要以一株产d一乙酰乳酸脱羧酶(a-acetolacetatedeearboxylase,EC．4．1．1．5，简称ALDC)的地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)BL。为出发菌株，进行诱变育种，以期获得高产菌株，并通过优化培养基组成、产酶条件和提取条件，进一步提高酶产量，旨在为ALDC的工业化生产提供一定理论依据。结果表明

2、：1。研究ALDC提取条件，确定采用超声波破碎细胞，在频率251(14z下每次辐射2秒，间隔2秒，总辐射时问4．6秒，输出功率500瓦，细胞浓度2％，破碎效果最好，产酶量最高。采用30％饱和度硫酸铵除杂蛋白，80％饱和度硫酸铵提取粗酶效果较好，菌体存放时间超过10天，酶活力明显降低。2．采用波长260hm，功率15W紫外线，辐射距离30cm左右进行诱变育种，通过诱变使新菌株酶活提高30％，传代五次稳定性良好。f。3．通过对UV3_BL,变株的产酶条件优化研究，其最适产酶培养基组成为：牛肉膏0．3％，胰蛋白胨2％，葡萄糖1％，柠檬酸0

3、．5％，K2HPOt·3H200．5％，ZnSO··7H：00．005％；在pH6．0，温度33"C，装液量iOOmL(500mL的三角瓶)，接种量i0％，发酵18h时产酶7．08U／mL。4．进行了ALDC的释放研究，在延滞期和对数期分别加入0．02％的甘氨酸、3．2万单位／mE的青霉素钠，培养18h，酶产量可提高到7．37U／IIlL，在一定浓度范围内，甘氨酸和青霉素钠对ALDC的释放及产量提高均有促进作用。／形磁通过对uv。—BL。变株ALDC的粗酶性质研究，表明酶反应的最适温度为35～45"C，最适pH为5．5；45"(2以

4、下pH5．0～6．5范围内，酶稳定性良好；Cu2+对酶活有很强的抑制作用，ca2+、Ba2+、Mn2+对酶活亦有轻微的抑制作用，而其它被检测的金属离子及EDTA对酶活性没有抑制作用。关键词：地衣芽孢杆菌。一乙酰乳酸脱羧酶啤酒／，耐／／——．耍童些堂三墨墨三旦堡主兰垡兰塞StudiesontheradioactivebreedingforhighALDCactivityandOptimizationofFermentationConditionsCandidate：ZhangJianAdvisor：Prof．ZhangWeiguang

5、(UniversityoffoodScienceandtechnology,SWAU，Chongqing400716，China)AbstractABacillusLichenifornisstrainBL4witha-aeetolacetatedeearboxylase(ALDC)activityastheinitialstlRinwasinducedbyUVradioactivebreeding．Throughoptimizingmicrobialcultureconditionsandstudyingextractcondit

6、ion，theenzymeyieldwasincreased．Theresearchresults[fieshowedaSfollowing：1．BystudyingextractconditionofALDC,theoptimumdisruptingcellconditionhasbeengotten：ultrasonicfrequency25KHz,ultrasonicpower500W,celldensity2％．radiate2secondeachtime，totalradiate4．6seconds，2secondinte

7、rval．Withthatconditi013．，wecanobtainedthehighestALDCactivity．Adopting80％ammomumsulfatetosalting-outALDCand30％ammomumsulfatetogetridofotherS．TheALDCactivitywillreducewjtllthedepositstimeincreasing．2．Adoptingultravioletradiationwithwavelength260nm，power500W，toradiateatad

8、istanceof30cm,astrainwiththestableALDCactivitywhichwas30％higherthantheinitialoneWasobtained．3．Theoptimumfermentationm