谷氨酰胺对脓毒症肺损伤炎症调控机制的实验研究

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1、南京大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人在导师指导下独立进行的研究工作所取得的成果。尽我所知，除了文中特别加以标注引用的内容外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中作了明确的说明并表示了谢二6巴恩。研究生签名：讧“子日期：1-忆V>南京大学学位论文使用授权声明本学位论文作者同意学校保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。除在保密期内的保密论文外，允许论文被查阅和借阅，可以公布(包括刊登)论文的全部

2、或部分内容。论文的公布(包括刊登)授权南京大学研究生院办理。一虢坼翩签蕊一目录IIIIIlUlMIIIllIIIIIIIIIIY2372141中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7—1￡．—jL4月U舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．13第一部分大鼠肺II型上皮细胞的分离培养⋯⋯⋯⋯⋯⋯17第二部分谷氨酰胺通过提高谷胱甘肽水平抑制内毒素诱导的大鼠肺泡II型上皮细胞炎性因子释放⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯28小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一5l第三部分谷氨酰胺通过提高

3、谷胱甘肽水平保护内毒素诱导的大鼠肺损伤⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯52小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯71全文结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯72文献综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯73发表文章目录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯85赴美留学总结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯86致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．89缩略词表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯I．II南京人学博士研究生学位论文南京大学研究生毕业论文中文摘要首页用纸毕业论文题目：签氢醛照过腿壹瘗盟塑笾

4、塞瘗迥控扭生』鲍塞验巫究2萱通窆I型专业2QQ鱼级博士生姓名：塑堕指导教师(姓名、职称)：奎主数拯王堑题量』数拯第一部分大鼠肺II型上皮细胞的分离培养目的：探讨一种简单分离成年大鼠肺II型上皮细胞的方法，建立大鼠肺II型上皮细胞(alveolitypeIIepithelialcells，AT-II)原代培养模型，为体外研究肺部疾病提供实验手段。方法：大鼠麻醉抗凝后，O．9％生理盐水灌洗气道和肺循环，分别采用O．1％、0．25％胰蛋白酶(简称“胰酶”)和0．02％EDTA、弹性蛋白酶消化液气道灌注消化150．2509SD大鼠肺组织，并用IgG包被的培养皿粘附纯化，碱性磷酸酶染色和电镜鉴定A卫

5、II。结果：O．1％胰酶消化提取的APII产量为2．2±O．5×107／鼠，纯度为94±1．2％，活力为97±O．4％；0．25％胰酶消化提取的AT-II产量为2．4±O．6×107／鼠，纯度为88±2．5％，活力为904-1．6％；弹性蛋白酶消化提取的AT-II产量为2．5+0．5×107／鼠，纯度为95±1．5％，活力为98+0．5％。三种方法所提取的细胞产量没有明显差异，但0．25％胰酶所提的AT-II活力和纯度明显低于0．01％胰酶和弹性蛋白酶。结论：O．1％胰酶和0．02％EDTA混合消化加IgG免疫粘附纯化可以简l南京人学博+研究生学位论文单有效的分离AnII，有利于原代培养A

6、T-II技术的推广。弹性蛋白酶消化是一种理想的方法，但价格昂贵。关键词：上皮细胞；原代培养；胰蛋白酶；弹性蛋白酶南京人学博士研究生学位论文第二部分谷氨酰胺通过提高谷胱甘肽水平抑制内毒素诱导的大鼠肺泡II型上皮细胞炎性因子释放目的：肺泡II型上皮细胞(A正II)细胞在受到内毒素(LPS)、氧化刺激时，可以分泌炎症介质，从而在急性呼吸窘迫综合症(AImS)的发生发展中起到重要作用。还原型／氧化型谷胱甘肽(GSH／GSSG)是ABII内完美的抗氧化系统，可以通过两者的转换，影响细胞的炎症反应、应激反应、细胞的增殖和凋亡等。谷氨酰胺(Gin)是GSH的前体物质，已有研究证实，在炎症刺激时，Gin可

7、以提高GSH的水平从而调节细胞的炎症反应。然而，对于Gin对LPS诱导的大鼠肺泡上皮细胞的GSH水平的影响及其对肿瘤坏死因子．a(TNF．a)、白介素(IL)一6分泌的调节以及其作用机制仍未见报道。方法：原代培养大鼠肺泡上皮细胞，分为0、O．5、2．0、10．0mMGln及0、10．0mMGln共六个组，作用2、8、16、24．0小时后，前四组1lag／mlLPS刺激24小时；另分为六组，前四组llag／mlLPS刺激4