肝癌细胞前列腺素E2受体表达和分布的研究

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1、Ya32755分类号：UDC：密级南京医科大学学位论文赶痤麴胞煎到照耋曼2受佳盔达塑金查数噩塞氆艘敛申请学位级别塑±专业名称痘翌堂论文提交日期2Q立查生4且论文答辩日期2QQ§生5目学位授予日期2鳗§生2目答辩委员会主席评阅人——2006年4月20日南京医科大学硕士学位论文肝癌细胞前列腺素E2受体表达和分布的研究(中文摘要)研究背景：环加氧酶一2(COX．2)及其产物前列腺素E2(PGE2)在细胞增殖中的作用一直受到人们的关注，在许多肿瘤组织中都有COX．2／PGE2的高表达现象，但PGE2影响肿瘤细胞生长的作用机理目前还不十分清楚，其作用的

2、多样性和特异性可能与EP受体的类型有关。通过大鼠和人胚肾细胞EP受体转染实验，人们推测四种EP受体可能通过各自不同的信号转导途径发挥作用，根据对以往EP受体信号转导通路分析，EPl、EP2、EP4受体激动后可能会因为激活了PKC、PKA、Akt而表现为促进肿瘤细胞生长；EP3受体激活后可能会由于抑制了cAMP／PICA的活性而阻碍肿瘤细胞的生长。在肝细胞癌细胞中发现COX-2／PGF-a可以通过激活Akt信号转导通路而促进肿瘤细胞的生长，但在胆管上皮癌细胞中，PGE：影响细胞生长的作用及其调控机理还未被人们所知。本实验通过测定胆管上皮癌细胞和

3、肝细胞癌细胞中四种PGE2受体的表达和定位，探讨受体及受体相关的细胞内信号转导通路影响肝癌细胞对PGE2不同反应性的机制。研究目的：基于肝癌细胞(肝细胞癌细胞和胆管上皮癌细胞)对PGE2作用的不同反应性，研究Hep3B、HuH7、SG231和HuCCTl人肝癌细胞株PGE2受体的表达类型和分布定位。研究方法：南京医科大学硕士学位论文1-细胞培养：取Hep3B、HuH7、SG231和HuCCTl人肝细胞癌细胞和胆管上皮癌细胞按常规方法培养。2．应用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)栅]同肝癌细胞株中四种EP受体mRNA的表述。3．采用上述肝癌

4、细胞的细胞涂片或细胞爬片，进行荧光免疫细胞化学实验，于荧光显微镜和共聚焦显微镜下观察上述四种EP受体蛋白的表达和定位分布。研究结果：1．逆转录聚合酶链式反应结果显示Hep3B、HuH7、SG23l和HuCCTl细胞株均同时具有四种EP受体mRNA的表达。2．荧光免疫细胞化学实验结果同样表明Hep3B、HuH7、SG231和HuCCTl细胞株均同时具有四种EP受体蛋白的表达。3．激光共聚焦显微镜观测结果显示四种EP受体不仅有细胞浆、细胞膜定位，而且部分在细胞核也有表达，其中EP4受体的表达主要定位于细胞核。研究结论：Hep3B、HuH7、SG2

5、31和HuCCTl四种肝癌细胞株均可以同时表达EPl、EP2、EP3和EP4受体，且受体的细胞内定位不同。肝癌细胞对前列腺素E2作用的不同反应性可能与EP受体的定位以及不同的细胞内信号转导通路激活有关。关链词：肝癌细胞前列腺素E2EP受体信号转导南京医科大学硕士学位论文TheexpressionoffourkindsofprostaglandinE2receptorsandtheirintracellularlocationinhumanlivercancercellsBackground：Recently，aheightenedintere

6、stintheroleofcyclooxyenase一2(COX-2)一derivedprostaglandinE2(PGE2)inneoplasiahasemerged．SomestudieshavedemonstratedCOX．2伊GE2．inducedstimulationofneoplasticandnon—neoplasticcellgrowth，whereasotherinvestigators’resultshavesuggestedantiproliferativeeffectsofPGE2．Asweknown，PGE2me

7、diatesitsphysiologicaleffectsbyinteractionswithasubfamilyofG。protein—coupledreceptorsknownasEPreceptors．ThesereceptorsconsistoffourprimarysubtypesnamedEPl，EP2，EP3andEP4．TheEPlreceptorsareknowntocoupletoGq，elevateintracellularCa2+concentration，andactivateproteinkinaseC(PKC)．

8、EP3receptorshavebeenfoundtocoupletoGiandinhibitintracellularcyclic3,5．adenosinemon