柳蒿芽中黄酮类物质的提取与纯化研究

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1、柳蒿芽中黄酮类物质的提取与纯化研究食品科学与工程013班赵媛媛指导教师王文侠张慧君摘要：本文以柳蒿芽为原料，进行了柳蒿芽中黄酮类物质的提取与纯化研究。通过单因素实验及正交实验确定提取柳蒿芽中黄酮类化合物的最优条件为8h、85~90℃、固液比1∶60、85%乙醇。采用静态吸附法，从8种吸附树脂中筛选出一种吸附性能较理想的大孔吸附树脂，并对此进行了pH与温度对吸附量影响实验，得出最佳树脂吸附黄酮物质的条件为温度40℃、pH为5、时间3h。采用动态吸附法确定了树脂吸附纯化柳蒿芽中黄酮类物质的工艺条件为：采用AB-8吸附树脂,上液量约为100～15

2、0mL,样液浓度约为1%，洗脱液浓度为70%,流速1mL/min。关键词：柳蒿芽；黄酮；提取；大孔树脂；吸附1前言黄酮类化合物作为一类重要的天然抗氧化剂，具有显著的抗氧化性能，清除自由基的能力、抗衰老及对老年病的防治功效。黄酮类化合物还是优良的活性氧清除剂和脂质抗氧化剂。黄酮类化合物在自然界分布广泛，属植物次级代谢物，另一组存在于蔬菜、水果、花和谷物中的天然色素，因多呈黄色，而称生物类黄酮。生物类黄酮具有多种生物活性，可配合维生素C在临床上使用。近年来随着研究方法和技术的不断提高，掀起了生物类黄酮的研究、开发、利用的热潮，其在医药、食品领域

3、的应用具有广阔的前景。但目前对柳蒿芽中黄酮类化合物的提取的[1-6]报道还很少,因此，我们开始了从柳蒿芽中提取黄酮类物质的研究。2材料与方法2.1实验材料与仪器2.1.1实验材料与试剂材料：本物料为柳蒿芽干物料，经捣碎机捣成粉末，储存于瓶中。试剂：卢丁（Rutinum）对照品、S-8、NKA、AB-8、X-5、D301、D2960、D4020、D3520树脂（天津南开和成科技有限公司）其它药品均为分析纯。2.1.2实验仪器与设备722分光光度计、回转式恒温调速摇瓶柜、数显pH计、恒温水浴震荡器、旋转蒸发器、循环水式真空泵。2.2检测方法2.

4、2.1柳蒿芽中黄酮含量测定见文献[2]。2.2.2蛋白质（微量凯氏定氮法）见文献[7]。2.2.3脂肪（索氏提取法）见文献[7]。12.2.4还原糖（3，5-二硝基水杨酸DNS比色法）见文献[7]。2.3实验方法2.3.1工艺流程物料→破碎→过筛→乙醇回流提取→过滤黄酮粗提液→减压浓缩回收乙醇→黄酮浸膏→稀释→上树脂柱→洗脱→黄酮精制液→干燥→成品。2.3.2柳蒿芽中黄酮提取工艺的研究（1）单因素实验由于提取过程中不同条件的影响，最后确定6种条件进行单因素确定实验。（2）优化实验由于在捣碎物料时出现多种物料状态，故进行实验的进一步优化。（3

5、）正交实验（4因素3水平）选取4种对提取工艺影响较大的条件进行正交实验。2.3.3柳蒿芽中黄酮类化合物吸附纯化的研究（1）吸附材料的准备①树脂的预处理与再生在吸附树脂生产过程中一般均采用工业级材料，产品没经过进一步净化处理，因此吸附树脂内往往残留少量单体，致孔剂和其他有机杂质，在产品储备期间为防止细菌、霉菌的生长有时加入碱等防腐剂。因此树脂在使用之前必须进行预处理，以除去制备和储存中引入的杂质。②料液的制备在提取工艺最优条件下（8h、85~90℃、1∶60固液比、85%乙醇）制备柳蒿芽提取物，经高压旋转蒸发浓缩回收乙醇，得少量浸膏，用温蒸馏

6、水溶解浸膏，用阿贝折光仪测定，配制出1%浓度的料液，待用。（2）吸附树脂的选择①实验部分称取经过预处理并干燥的8种大孔吸附树脂各2g，充分水合后置于250mL具塞锥形瓶中，分别向瓶中加入20mL样液（浸膏用蒸馏水调成1%的溶液）在水浴振荡器中以一定速度进行振荡吸附24h，测定平衡后溶液的吸光度，除去黄酮样液，加入85%的乙醇水溶液在相同条件下进行振荡解吸，分别用公式计算各树脂的静态吸附率和解吸率，从而选取吸附与解吸效果综合考虑最好的树脂。②计算C0−CEA0−AEE%=×100%=×100%C0A0CXAXD%=×100%=×100%C0−

7、CeA0−Ae其中，E——吸附率（%）；D——解吸率（%）；A0——吸附前溶液吸光度；Ae——吸附平衡2后溶液吸光度；C0——吸附前溶液浓度（mg/mL）;Ce——吸附平衡后溶液浓度（mg/mL）;Cx——解吸液浓度（mg/mL）。（3）静态吸附等温曲线取9个250mL锥行瓶，分别精确称取2gAB-8树脂颗粒放入其中，再加入20mL配制好的样液2.3.2，放入25℃水浴摇床上振荡，并开始计时。分别在15，30，45，60，90，120，180，240，300min时取出1瓶进行黄酮含量比色测定。（4）pH对吸附量的影响黄酮类化合物为酚性成分

8、，属多环多元酚类，由于含苯并γ-吡酮而形成β-烯醇酮结构，这种烯醇酮结构所表现的特性是黄酮分子中的酚羟基的弱酸性。因此pH对其存在的分子形态有一定的影响，在弱酸性条件下易以分子状