泰乐菌素（tylosin）酶联免疫分析（elisa）

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1、泰乐菌素(Tylosin)酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。1使用目的：本试剂盒用于饲料、鱼、虾和肉类组织（如鸡、牛肉和猪肉），鸡蛋、蜂蜜、牛奶、血清和尿样中泰乐菌素(Tylosin)残留的定量检测。2实验原理本试剂盒采用竞争ELISA方法，在微孔板包被有泰乐菌素(Tylosin)偶联抗原，加入泰乐菌素(Tylosin)标准品或样品，游离泰乐菌素(Tylosin)与微孔条上预包被的泰乐菌素(Tylosin)偶联抗原互相竞争抗泰乐菌素(Tylosin)抗体酶标记物，用TM

2、B底物显色，加入终止液后颜色由蓝色变为黄色，用酶标仪在450nm波长下进行检测，吸光值与样品中泰乐菌素(Tylosin)含量成反比，通过标准曲线计算样品中泰乐菌素(Tylosin)的含量。3试剂盒组成3.1预包被的泰乐菌素(Tylosin)偶联抗原的可拆酶标板：1块（12孔×8条）。3.2泰乐菌素(Tylosin)标准品：6瓶（1ml/瓶），含量分别是：0ppb，0.1ppb,0.3ppb,0.9ppb,2.7ppb,8.1ppb3.3抗泰乐菌素(Tylosin)抗体酶结合物：1瓶（6ml）。3.4

3、显色液A：1瓶（6ml）。3.5显色液B：1瓶（6ml）。3.6终止液：1瓶（6ml），2M硫酸。3.7样本稀释液：1瓶（10×,6ml），用于样品稀释用。3.8浓缩洗涤液：1瓶（20×，20ml），用于洗板。3.9说明书一份。54需要而未提供的材料4.1设备4.1.1波长450nm酶标仪。4.1.2粉碎机。4.1.3量筒。4.1.4振荡器。4.1.5漏斗。4.1.6WhatmanNo1或相当的滤纸。4.1.7微量移液器。4.2试剂4.2.1去离子水或蒸馏水。4.2.2甲醇。5贮存5.1试剂盒贮存于

4、2~8℃，切勿冷冻5.2未用完的微孔板应该密封干燥保存6注意事项6.1使用试剂盒前请仔细阅读说明书。56.2不要使用过期试剂盒。6.3试剂盒使用前，将试剂恢复至室温（25±2℃），建议至少回温2小时。6.4标准品中含有泰乐菌素(Tylosin)，使用时应特别注意，操作时应带手套。6.5终止液中含有硫酸，使用时防止灼伤皮肤及腐蚀衣物。6.6不同标准品、样品所用吸头不能混用，否则会影响试验结果。6.7不同批号试剂盒中的试剂不得混用；不同标准品、样品所用吸头不得混用，否则会影响实验结果。6.8稀释样本时必

5、须用本试剂盒中的样本稀释液，否则会影响实验结果6.9混合试剂时应避免起泡。7工作液准备7.1泰乐菌素(Tylosin)标准品溶液：0ppb，0.1ppb,0.3ppb,0.9ppb,2.7ppb,8.1ppb7.2浓缩洗涤液：用蒸馏水按1:20(1+19)稀释备用7.3样本稀释液：用蒸馏水按1:10(1+9)稀释备用7.3显色剂：已备用，避免光线直照7.4反应终止液：已备用8样品处理程序（样品在提取过程中，要严格按说明书操作，提取过程中应准确稀释，否则会出现结果不准确，样品应当保存在阴凉避光之处及冷

6、藏保存）8.1.1牛奶脱脂奶：直接分析。全脂奶：13000g离心15分钟，取上清液检测（避免取到乳脂）8.1.2肝脏：（稀释倍数2）--称取2g已绞碎的样品到试管中。--加入14ml的乙腈，然后均质（用20000rpm均质几分钟）。--振荡15分钟，然后2500g离心15分钟。--取上清液1ml到另一玻璃管中在40-50℃下蒸干（利用氮气吹干仪或者旋转蒸发器）。--加入250μl去离子水并漩涡混合。--溶液待测。8.1.3鸡蛋：（稀释倍数2）--取2g样品到试管中，加入6mL乙腈。--振荡15分钟，

7、然后3000g离心15分钟。--取上清液1ml到另一玻璃管中蒸干（40-50℃）。--加入500μl去离子水并漩涡混合。--溶液待测。8.1.4蜂蜜：(稀释倍数2)---取蜂蜜2g，置于离心管中（约15mL），加入4mL水溶解。--加入2ml乙酸乙脂后，振荡均匀。--然后3000rpm，离心15分钟。--取上清液0.5ml置于萃取管中于水浴60℃下以氮气吹干。--加入0.5ml去离子水混合，振荡约10秒钟。--取100μl待测。推荐使用的其它样品的前处理方法：8.2.1组织样：（稀释倍数1）--取3

8、g绞碎样品置入50ml离心管中。--加入6ml乙酸乙酯均质。5--以3000g离心10分钟。--取2ml上清液置入10ml塞玻璃管中，于水浴50℃下以氮气吹干。--于此玻璃管中加入2ml正己烷，振荡混合。--再加入1ml去离子水，振荡混合约10秒钟，以离心机3,000g离心10分钟。--利用吸管吸去包含中间乳化层部分的上层液（正己烷层）；--取50μl待测。8.2.2血清血浆：（稀释倍数1）--移取1ml血清或血浆至试管中，加2ml乙酸乙酯振荡1分钟。--室温3000