uv诱导大肠杆菌抗鲎素菌株筛选 毕业论文

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1、本科毕业论文题目：UV诱导大肠杆菌抗鲎素菌株筛选系别：生物工程系专业：生物技术姓名：学号：092408149指导教师：2012年5月18日目录摘要iABSTRACTii一文献综述11.1鲎的分类及地理分布21.2鲎的形态结构及药用价值21.2.1外部形态21.2.2内部构造21.2.3鲎的药用价值31.3鲎血淋巴抗菌肽31.3.1鲎素的抗微生物和抗菌活性41.3.2抑制肿瘤细胞增殖和诱导癌细胞分化的作用41.3.3鲎试验法(细菌内毒素检查法)61.3.4鲎素抗菌肽抗菌机理61.4物理诱变技术71.4.1紫外照射71.4.2电离辐射81.4.3离子注

2、入91.4.4激光91.4.5微波101.4.6空间技术诱变101.5化学诱变101.5.1烷化剂111.5.2碱基类似物111.5.3无机化合物111.5.4其他12二材料与方法132.1材料132.1.1试验材料132.1.2主要仪器设备132.1.3主要试剂142.2技术路线142.3实验步骤142.3.1生长曲线的测定142.3.2紫外线诱变152.3.3浓度梯度法筛选抗鲎素菌株152.3.4药敏试验162.3.5耐药稳定性测定16三结果与分析173.1大肠杆菌ATCC25922和JM109生长曲线的测定173.2紫外光诱变最佳照射时间的确

3、定183.3梯度梯度法筛选抗鲎素菌株203.4药敏试验203.5耐药稳定性测定20四讨论和结论214.1讨论214.1.1大肠杆菌生长曲线的测定方法的探讨214.1.2紫外线诱导细菌的探讨214.1.3药敏试验的探讨224.2结论22参考文献24致谢31摘要中国鲎鲎素I(Tachyplesin-I)是从古老的海洋生物中国鲎(Tachypleustridentatus，Chinesehorseshoecrab)血细胞中分离纯化的一种小分子多肽。现已证实中国鲎鲎素具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤等多种生物活性。本实验以大肠杆菌ATCC25922和JM109为出

4、发菌株，通过紫外线诱变技术对原始菌株进行诱变，并通过鲎素浓度梯度对大肠杆菌进行初筛，采用微量稀释法研究鲎素对初筛的菌株的最小抑菌浓度，以得到抗鲎素的大肠杆菌菌株。实验结果表明：1、通过紫外分光光度计检测波长为600nm下不同培养时间的菌液的吸光度，，得到大肠杆菌的生长曲线，在培养2～12h时均呈现上升趋势，依次经历迟缓期、对数期、到达稳定期。2.采用紫外线诱变处理的方法，对大肠杆菌ATCC25922和JM109进行处理；大肠杆菌ATCC25922和JM109菌株在照射时间为90s、120s、150s的菌种致死率均>90％；在紫外诱变60s时的菌落大

5、小明显变大。3、通过微量稀释法测得鲎素对大肠杆菌ATCC25922和JM109原始菌株的最小抑菌浓度分别为5μg/mL、10μg/mL，最小杀菌浓度分别为20μg/mL、40μg/mL。4、采用紫外诱变和鲎素浓度梯度筛选的的方法，从中筛选得到低抗鲎素的大肠杆菌ATCC25922突变菌株ATCC25922-A1-90、E.coliATCC25922-A2-90、ATCC25922-A1-603株。诱变的大肠杆菌ATCC25922-A1-90和大肠杆菌ATCC25922-A1-90菌株与亲本大肠杆菌ATTCC25922菌株的最小抑菌浓度相比较，其抗药性

6、提高了2倍，大肠杆菌ATCC25922-A1-60其抗药性提高了4倍。对其筛选到的大肠杆菌ATCC25922突变菌株进行连续在多少抗鲎素浓度上进行连续转接12代，其最小抑菌浓度无变化。5、对于大肠杆菌JM109菌株经过紫外线诱变后，一部分发生了负突变，变更为更敏感的菌株和一部分未变化的菌株，未诱导出抗鲎素菌株。31关键词：鲎素紫外线最小抑菌浓度抗药菌株筛选ABSTRACTTachyplesin-I,acationicpeptideconsistingof17residues,wasisolatedfromacidextractsofhorsesho

7、ecrab(Tachypleustridentatus,Chinesehorseshoecrab)hemocytedebris.Tachyplesin-Iactsasantimicrobialpeptide．IthasastrongantimicrobialeffectonthegrowthofGram-negativeR-typebacteriaandshowsantivirusandantitumoractivity.ToscreentheidealresistantstraintoTachyplesin-I,ourresearchtreate

8、dE.coliATCC25922andJM109withultravioletmutation.Bycalculation