reelin调节小鼠喙端迁移流发育的形态学研究

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2、RMS)ofmouseADissertationSubmittedtotheGraduateSchoolofHenanUniversityinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofMedicineByShiShuqinSupervisor:Prof.YinMingweiDateMay,2015摘要神经干细胞指的是一类特定的干细胞，它具有自我更新能力，通过非对称分裂方式产生其他细胞从而生成神经组织。神经干细胞的孵育成熟、迁移和

3、分化与中枢神经系统的发育息息相关，对于理解神经系统发育、损伤及其修复机制至关重要。神经干细胞的增殖、孵育成熟是个体生长发育的基础；神经干细胞的定向迁移是胚胎神经系统发育的先决条件，个体发育以及组织损伤修复都依赖于干细胞的定向迁移；细胞迁移到特定的部位受到一系列的分子信号的调控而后分化为特定的细胞发挥其功能，神经干细胞的分化为个体不同器官的形成、发育及各个功能的完善提供了必要条件。目前已确定的细胞迁移方式有两种：放射状迁移和切线迁移。Doetsch认为喙端迁移流（RostralMigratoryStr

4、eam,RMS）是由室管膜下区（SubventricularZone,SVZ）的迁移细胞从后至前贯穿于整个侧脑室外侧壁汇聚而成，RMS是SVZ神经干细胞向嗅球部位迁移所经过的高度受限通道。RMS作为细胞切线迁移的典型代表，是研究切线迁移的最佳模型。Reelin蛋白是细胞迁移起始与停止的调节信号，载脂蛋白E2受体（ApolipoproteinEReceptor2,ApoER2）和极低密度脂蛋白受体（VeryLowDensityLipoproteinReceptor,VLDLR）参与Reelin信号通路

5、，Reelin蛋白与二者相结合，诱导胞内效应器Dab1磷酸化，从而使迁移的细胞从其支架—放射状胶质细胞纤维上脱落，按照“inside-out”模式迁移定位，形成皮质的六层结构。作为调节细胞迁移的重要信号，Reelin对神经细胞迁移、皮质片层化形成和大脑皮质发育起着非常重要的作用。Reelin蛋白合成或分泌障碍甚至异常都将导致一系列的精神系统疾病，比如精神分裂症、颞叶癫痫症及自闭症等等，因此了解Reelin对神经系统发育的影响有着一定的基础意义，对精神系统疾病的治疗有一定的临床指导意义。长期以来，人们

6、对Reelin信号通路在放射状迁移中的作用进行了大量研究，但是Reelin信号通路在RMS发育中承担的角色尚不清楚。因此，我们采用野生型（WildType,WT）小鼠和reeler小鼠作为实验动物，应用免疫组织荧光技术、墨汁灌注技术及电镜技术，标记并观察神经干细胞、胶质细胞以及血管发生之间的相互关系，比较两组小鼠RMS发育情况。目的：探讨小鼠室管膜下区神经干细胞孵育成熟的微环境及其结构以及神经干细胞沿RMS切线迁移至嗅球(OlfactoryBulb,OB)并在嗅球分化整合的过程，尤其是Reelin对

7、细胞迁移和细胞分化的影响。方法：选用50只WT小鼠和23只纯合reeler小鼠胚胎16天至生后90天的各年龄点小鼠大脑共计73只，应用Evansblue脑室注射技术标记神经干细胞的动态迁移，采用免疫荧光技术、墨汁灌注技术及电镜技术，标记并观察小鼠大脑的神经干细胞、胶质细胞以及血管发生之间的相互关系，比较两组小鼠RMS发育情况。结果：①胚胎后期至出生早期，在SVZ分布着大量的胶质细胞、神经干细胞和血管网，它们相互联系构成SVZ神经干细胞孵育的血管龛；②神经干细胞在血管龛孵育成熟后，可以进入RMS，切线

8、迁移至嗅球，到达嗅球后转变为放射状迁移，向四周分化为各类神经元整合入嗅球形成嗅球的各层结构。神经干细胞在RMS的迁移过程中，放射状胶质细胞协同血管为其提供引导支架；③Reeler小鼠的神经干细胞增殖区及细胞分化与WT小鼠是相似的，reeler小鼠也能形成RMS，但形态有所改变，主要在嗅球处，神经干细胞失去规律排列，呈散乱分布。Reeler小鼠血管发育紊乱主要表现在分支增多，走向杂乱。结论：室管下区的血管龛（niche）是神经干细胞的主要来源，血管龛为神经干细胞的增殖和