自噬在紫杉醇诱导siha细胞凋亡中的作用

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1、自噬在紫杉醇诱导siha细胞凋亡中的作用AutophagyintheroleofPaclitaxel-inducedApoptosisofsihacells作者姓名：赵峰领域（方向）：妇产科学指导教师：王渠源副教授类别：临床医学硕士答辩日期：2015年5月30日前言宫颈癌在女性常见恶性肿瘤发病率中居第二位，是妇女生殖器官最常见的恶性肿瘤，是妇女癌症死亡的主要原因之一。据统计世界范围内每年宫颈癌的新增病例数大约有50万例，其中我国每年的新发病数约占全世界每年发病数的1/3。按照病理分型可将宫颈癌分为宫鳞状细胞癌、腺癌及腺鳞癌等，在这些

2、分类中以鳞状细胞癌最为常见，约占宫颈癌的75%-80%。随着宫颈细胞学筛查在临床上广泛的应用，子宫颈癌及其癌前病变能够及早的得到发现和治疗，从而使宫颈癌的死亡率和发病率明显下降。但近几年来宫颈癌发病群体低龄化的趋势越来越严重。临床上宫颈癌的治主要疗方案有手术、放疗、化疗等。尽管治疗手段得到不断地改进，但是宫颈癌晚期患者的５年生存率仅［１］为５０％左右。近年来由于放疗对卵巢功能的影响及新辅助化疗（neoadjuvantchemotherapy,NACT）的出现，宫颈癌的化疗受到越来越多的关注。目前宫颈癌的化疗方案呈现多样化，但主要以紫

3、杉醇+铂类的化疗方案最为常见，但是宫颈癌对常见化疗药物存在一定的耐药性，化疗效果并不理想。紫杉醇（Paclitaxel）是宫颈癌的一线化疗药物，它主要影响微管的稳定性来导致细胞在有丝分裂的过程中无法形成纺锤丝和纺锤体，从而使细胞不能进行有丝分裂和增殖，使细胞发生凋亡来发挥抗肿瘤作用。同时紫杉醇还可以影响信号转导通路直接诱发细胞凋亡［2］。但是紫杉醇抗肿瘤药理作用的发挥往往需要很高的剂量，因此紫杉醇引起的不良反应也较多，如过敏，白细胞、血小板减少及胃肠I道不适等。同时紫杉醇的耐药现象也很常见。如何提高宫颈癌肿瘤细胞对紫杉醇的敏感性，降

4、低不良反应是目前临床治疗宫颈癌急需解决的问题。然而近期的研究表明，紫杉醇在导致肿瘤细胞凋亡过程中也[3]可诱导自噬的产生。刘飞等报道紫杉醇可以诱导宫颈hela细胞产生凋亡的同时还引起了hela细胞的自噬性死亡，这其中自噬扮演了一种死亡机制，然而紫杉醇能否引起宫颈鳞癌siha细胞自噬以及自噬在其中的作用则研究比较少。目前已知的生物体内存在的细胞死亡方式有两种：Ⅰ型程序性细胞死亡即细胞凋亡和II型程序性细胞死亡即细胞自噬，临床上化疗药物大多通过使肿瘤细胞凋亡而产生抗肿瘤作用，同时细胞自噬也扮演重要角色。但由于凋亡耐受的产生也使化疗效果降

5、低。将自噬引入宫颈癌的化疗可能成为新的治疗方向。细胞自噬是一种细胞自我降解的过程，在适应代谢应激、保持基因组完整性及维持内环境稳定等方面发挥重要作用。因此自噬的主要功能是真核细胞在营养、能量缺乏或受到应激性刺激等不利因素时，使细胞能够有能力维持稳态、对抗不利环境、实现新陈代谢，是细胞在恶劣条件下的一种自我保护性反［4］应。然而当细胞遭受到的损伤严重到不可修复时，例如某些化疗药物的作用、大剂量的电离辐射照射等，自噬便成为使细胞发生死亡的机制，即II型程序性细胞死亡：自噬性死亡。由于自噬的这一两面性，有关其在化疗中的作用的研究受到极大关

6、注。并且在化疗过程中肿瘤细胞产生的自噬或者自噬性细胞死亡及其在宫颈癌化疗中的作用还不是很明确，因此，阐明自噬在宫颈癌的治疗中发挥的作用和II机制有利于更好的发挥化疗药物的治疗效果。III摘要自噬在紫杉醇诱导siha细胞凋亡中的作用宫颈癌在女性恶性肿瘤的发病率中仅次于乳腺癌，是女性生殖器官最常见的恶性肿瘤。宫颈癌的临床治疗手段主要以手术和放疗为主，辅以化疗。尽管治疗手段得到不断地改进，但是晚期患者生存率并没有显著提高，同时近几年来宫颈癌发病群体低龄化趋势越来越明显、以手术和放疗为主的治疗方法的对卵巢功能的影响较大及新辅助化疗（NACT

7、）的临床效果比较明显，现阶段宫颈癌的化疗越来越受到关注。作为宫颈癌一线化疗药物的紫杉醇已经证实在引起多种肿瘤细胞凋亡的同时还可以引起肿瘤细胞的自噬，由于自噬的两面性，本实验初步探讨自噬在紫杉醇诱导siha细胞凋亡中的作用和机制，希望能够为宫颈癌的临床化疗进行新的优化。目的：采用人宫颈癌siha细胞为研究对象，探讨自噬在紫杉醇诱导siha细胞凋亡中的作用和机制。为临床宫颈癌化疗方案的优化以及新的治疗切入点的探索提供合理的理论基础及依据。方法:本实验采用体外培养人宫颈鳞癌siha细胞株，进行以下研究。1、通过MTT比色法检测紫杉醇诱导宫

8、颈癌Siha细胞的死亡情况，并初步探讨自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）对该种死亡的作用。2、通过流式细胞术进一步检测紫杉醇诱导宫颈癌Siha细胞的凋亡以及3-MA对该种细胞死亡的影响。3、通过吖啶橙染色(AO染色)证明紫杉醇诱导宫