流感病毒与呼吸道合胞病毒双重感染balbc小鼠的研究

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1、也文《曲如皆爭供中刮《獻博：ｔ研究生学位论义北京协和医学院研究生院学校代码：１００２３学号：Ｂ２０１２０１８００６博±学位论文流感病毒与呼吸道合胞病毒双重感染ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠的研究ＴｈｅＲｅｓｅａｒｃｈｉ打ＤｕａｌＩｎｆｅｃｔｗｉｔｈＩｎｆｌｕｅｎｚａｖｉｒｕｓａｎｄＲｅｓｐｉｒａｔｏｒｙＳｙｎｃｙｔｉａｌｖｉｒｕｓｏｎＢＡＬＢ／ｃ所院；医学生物学研究所姓名：冯凯指导教师；刘龙下教授导师小沮；李埼涵教授王晶晶郭磊学

2、科专业：免疫学研究方向：病毒免疫学完成日期：２０１５年４月‘＇ｉ‘：：：院叫仪：院帖北扣帖和阳７Ｎ７巧７Ｉ；研兒ｋ７Ｒ论摘要１Ｓｕｍｍａｒｙ３１Ｍｍ５１１．流感病毒的感染机制及分离培养７１．２呼吸道合胞病毒的感染机制及分离培养９１．３病毒感染的细胞免疫机制１２１．４ＴｈｌＴｈ２Ｔｈｌ７和Ｔｒｅ细胞１３，，ｇ１．５实验思路１４一第部分病奉的准备巧１实验腿及方法１５１．１＃料１５１丄１１５病毒１丄２设各

3、和仪器巧１．２试验方法１５．１２．１细胞及培养体系１５１．２．２ＰＲ８病毒葦种在鸡胚中扩増１６１．２．３血巧抑制实骇（ＨＡｅｓｔ）１７ｔ滴定病毒血凝效价１．２．４细施复苏及扩増１７１．２．５Ｖｅｒｏ细胞扩増流感病毒１８１２６Ｈｅ－２ＳＶ１８．．ｐ细施扩増Ｒ毒种．１．２７Ｖｅｒｏ细胞扩増ＲＳＶ病毒１８１．２．８病毒ＣＣＩＤｓｏ的检测１９１．２．８．１ＰＲ８ＣＣ用ＭＤＣＫＩＤ１９细胞测定的ｓｏ１－．２．８．２用Ｈｅ２

4、ＲＳＶＣ曰Ｄ２０ｐ细胞測定的ｓｏ１．３结果２０ＩＤ血凝效价１．３．１ＰＲ８ＣＣｓｏ及２０１ＲＳＶＣＣＩＤ２１．３．２ｓｏ１４．小结２２第二部分Ｈ１Ｎ１和ＲＳＶ双重感染ＢＡＬＢ／ｃ小鼠的研巧２３２４１实验材料及方法１．１材料２４１．１．１试剂耗材及试剂盒２４１．１．２实验动物２４．．３巧１１病毒和攻毒剂量１丄４仪器设备２５１．２实验方法２５１．２．１动物分组２５１．２．２攻毒方法２５１．２．３小鼠腹腔

5、主动脉采血，取脾脏２６１．２．４小鼠脾淋巴细胞分离２７１．２．５淋己细胞表面舒＃２８１．２．６小鼠肺灌洗液ＢＡＬＦ收集及细胞涂片制备巧１．２．７ＢＡＬＦ中细胞因子检测巧１．２．８小鼠肺组织获取及固定２９１１：北成化和医巧院；１１护７科巧院晚．：１；｜中１研究巧化皮义１－２．９小鼠肺组织切片及ＨＥ染色巧１．２．１０小鼠肺组织悬液制备３１．．１１２１懂斑法检测肺悬液的病奉３１１．２．１２ＲＮＡ２小鼠肺总提取３１．２．１３病毒ＲＮＡ提取

6、３３１４－ＰＣＲ．２．１普通ＲＴ检测肺部病毒３３１．２．１５病毒检测弓Ｉ物及探针３３ｙ定量引物及探针设计３３２性和灵敏性３４）引物和探针的榜异１．２．１６病奉拷贝数定量参考标准品ＲＮＡ制备３４ｙ基因片段选择和引物设计３４２Ｔ７启动巧）子序列构建３参考标准品ＲＮＡ体外转录及纯化化）１．２．１７小鼠肺组织病毒载量检测１．２．：１８病毒拷贝数计算３７１．２．巧小鼠呼吸道病理切片制备３８１．２．２０病理切片化染色３８．１２．２１石蜡切

7、片免疫组化（ＩＨＣ）检测抗原巧４０１．３娜及分析１．３．１小鼠表现及体重检测４０１．３．２病原学分析４１１．３．２．１双重感染的鮮４１１．３．２．２病春觀检測４２１．３．３小鼠肺石蜡切片ＨＥ染色分化免疫组化检测病毒４４１．３．４病理研巧小结：５３１３ｈ．．５淋己细胞及Ｔ细胞亚群的免疫机制５６１．３．５．１ＣＤ３＋，ＣＤ４＋，ＣＤ８＋细胞化例５７１．３．５．２ＴｈｌＴｈ２５８和细胞１．３．５．３Ｔｈｌ７细胞比例分析５９１

8、．３．５．４Ｔｒｅｇ细胞比例分析６０１．３．６ＢＡＬＦ中细胞因子浓度５４；１．４讨ｉ＆６１１．４．１病奉性呼吸道感染的常见临床症状６１１．４．２双重感染中的抗病辜免疫机制６４１．４．３Ｔｈ亚群相关性分析５９１．５小结７１参考文献７２縣８４Ｉ主要溶液配制ＩＩ北京协和医学院中国医学科学院博±研巧生学位论文摘要呼吸道感染是临床常见疾病，在众多病原体中能导致呼吸道急性炎症并