扬子鳄卵泡刺激素fshβ及其受体fshr的分子结构及在雌性生殖周期中的时空表达变化

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3、授予学位日期２０１５；、：年６月，苗ｆ．端、■！．＇山ａ．Ｂｒｖｖ？織产Ｖ安徽师范大学学位评定委员会办公室若．Ｖ：；ｉ／扬子鳄卵泡刺激素FSHβ及其受体FSHR的分子结构及在雌性生殖周期中的时空表达变化张瑞安徽师范大学硕士学位论文二Ｏ一五年四月扬子鳄卵泡刺激素FSHβ及其受体FSHR的分子结构及在雌性生殖周期中的时空表达变化摘要扬子鳄（Alligatorsinensis）是我国特有的珍稀濒危爬行动物，上个世纪八十年代已开展人工养殖并获成功，虽然扬子鳄人工

4、孵化和饲养问题已得到较好的解决，但对扬子鳄生殖调控的分子机理还知之甚少。脊椎动物的繁殖主要受下丘脑-垂体-性腺轴的控制，促卵泡激素(FSH)是重要的生殖激素对性腺的发育具有着至关重要的作用，促卵泡激素与促甲状腺激素(TSH)、促黄体生成素(LH)和绒毛膜促性腺激素(CG)同属于糖蛋白激素家族，它们均由α和β两个亚基组成，α亚基为各激素所共有，β亚基是每种激素的特异亚基，发挥着重要作用。促卵泡激素β亚基(FSHβ)在脊椎动物的繁殖过程中扮演着重要的角色，在卵泡发育、雌二醇的产生、精子的发生中发挥着重要的作

5、用，其作用通过卵泡刺激素受体（FSHR）介导。本实验采用RT-PCR和cDNA末端快速扩增(RACE)技术首次克隆出了扬子鳄(Alligatorsinensis)FSHβ及其受体(FSHR)cDNA全序列，并对其核苷酸序列及编码的氨基酸序列进行生物信息学分析，同时通过qRT-PCR技术对两个基因在雌性生殖周期中的时空表达变化进行了研究，结果如下：FSHβcDNA全长843bp，其中包括5’端非翻译区120bp，3’端非翻译区327bp和开放阅读框396bp。FSHβ编码131个氨基酸，包括18个氨基酸的

6、信号肽和113个氨基酸的成熟肽。在线分析表明：扬子鳄FSHβ氨基酸序列存在信号肽序列，信号肽分裂位点在Cys18-Asn19处。氨基酸序列的比对结果显示：扬子鳄和密西西比鳄FSHβ序列一致性最高，达100%，与鸟类相似度约89-92%。用邻近法(NeighborjoiningNJ)构建的系统进化树显示扬子鳄FSHβ与鸟类具有很高的亲缘关系。组织表达分析表明，FSHβ不仅在卵巢中有很高的表达，而且在肠及肝中均有表达，但未在胃、胰、心、胸腺、甲状腺中检测到相应的表达。定量PCR显示FSHβ在1至5月(繁殖前

7、期)表达量较低，7月(繁殖期)达到最高的表达量，在9月(繁殖后期)仍保持较高的表达·I·水平，随后在11月(繁殖后期)表达量急剧下降且表达量最低。FSHR基因的cDNA全长为2643bp，其中包括5’端非翻译区78bp，3’端非翻译区477bp和开放阅读框2088bp，编码695个氨基酸。FSHR基因编码的氨基酸具有信号肽切割位点，位于17位的甘氨酸(Gly)与18位的半胱氨酸(Cys)之间。扬子鳄FSHR不仅含有糖蛋白激素受体的典型结构，同时也包含一些与其它物种FSHR所不同的特殊结构。将扬子鳄与其他

8、脊椎动物的FSHR基因的氨基酸序列进行一致性比较，结果发现扬子鳄与爬行类的中华鳖的FSHR氨基酸序列一致性较高，为85%，与鸟类为84%-87%，哺乳类为77–78%，两栖类为67–73%，与鱼类的氨基酸序列一致性最低，在51–58%之间。用邻近法(NeighborjoiningNJ)构建的系统进化树显示扬子鳄FSHR受体与爬行类的中华鳖同源性非常近且与鸟类聚为一支。组织表达分析表明，FSHR不仅在卵巢中有很高的表达，而且在胃、肠、胰、肝及