小立碗藓胚胎晚期丰富蛋白基因转化玉米hi-ⅱ及其检测分析

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1、ｐ．．Ｊ－－Ｊ分类号Ｉ密化ｗ鴻ｔ＃；Ｉ硕±研究生学位论文．小立碗薛巧胎晚期丰富蛋白基因转化玉米－论文题目（中文）出ＩＩ及其检测分析Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆ画献ｅ佩戶／ＣＭＳ－论文题目ＰｒｏｔｅｉｎＧｅｎｅｉｎＭａｉｚｅＷＩＩａｎｄ（外文）ＬＥ乂寸｜＾＾逵ＡｎａｌｓｉｓｏｆＤｅｔｅｃｔｉｏｎｙ＾Ｊ韦．＾研究生姓名王艳蓉＾＇？草坪生物学—成Ｍ学科、专业生物学？■—，＾草坪？物种质资源评价与利；ｎ

2、研究方向学位级别硕±导师姓名、职称路铁刚研究员ｊ论文工作４ｈ＾９２０１２年８月至２０巧年４月起±年月—誤編＊论文提交日期２０１５年４月作讀＇＇—■——＇＇＇论文答辩日期２０１５年５月Ｉ聲＾＇学位授予日期＇校址：甘巧省兰州市：５扛＞！－ｆＪＩ原创化声明本人郑重声明：本人所呈交的学位论文，是在导师的指导下独立进行研究所取得的成果。学位论文牛凡引用他人己经发表或未发表的成果、数据、观点等，巧已明确注明出处。除

3、文中己经注明引用的内容外，不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究成果做出重要贡的个人和集体，均已在文中Ｗ明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。ｉｋ＞ｖＴ、论文作者签名秦日期（Ｗ：托：关于学位论文使用授权的声明本人在导师指导下所完成的论文及相关的职务作品，知识产权巧属兰州大学。本人完全了解竺州大学有关保存、使用学位论文的规定，同意学校保存或向国家有关部口或机构送交论文的纸质版和电子版，允许论文被查阅和借阅１；本人授权兰州大学可＾将本学位论文的全部或部分内容编

4、入有关数据库进行检索，可采用任何复制手段保存和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为兰州大学。本位论文研究内容：＾公开□不宜公开，己在学位办公室办理保密申请，解密后适用本授权书。＂＂一Ｖ（请在Ｗ上选项内选择其中项打）论文作者签名：雖鬼导师签名：减，王■６Ｍ日期．日期；；１Ｈ－小立碗齊胚胎晚期丰富蛋白基因转化玉米ｉ化及其检测分析中文摘要玉米作为重要的饲料作物在世界范围内分布十分广泛，干旱、寒冷、盐碱

5、等非生物逆境是严重影响饲喂玉米产量的限制因素。胚胎晚期丰富蛋白（ＬＥＡ一蛋白）是在胚胎发育后期大量积累的系列蛋白，被认为具有提窩植物抗逆性的功能。本实验Ｗ从小立碗薛中分离得到的ＬＥＡ８９８１蛋白基因为外源基因，使ｃ－用组成型的Ａｔｉｎ启动子在玉米品种ＨｉＩＩ中表达ＬＥＡ８９８１，得到转基因阳性植。株，后对转基因植株和野生型进行抗旱处理，验证其抗旱性使用基因枪轰击玉米愈伤的方式，将带有ＬＥＡ８９８１表达盒的片段与带有选择基因Ｂａｒ表达盒的片段转化玉米，获得了１个阳性转基因株系，并对其进行抗旱性分析，

6、结果带有ＬＥＡ蛋白的转基因玉米相对于野生型具有更强的抗旱性，干旱处理后转基因二。植株体内的脯氨酸含量高于野生型，而丙酸含量低于野生型利用±壌农杆菌ＥＨＡａｌｌ侵染玉米幼胚的方法，将ＬＥＡ８９８１与Ｂａｒ转化玉米，最终获得了ｇ－１０个转基因阳性株系姻过ＲＴＰＣ民和Ｓｏｕ化ｅｍＢｌｏｔ实验证明ＬＥＡ蛋白基因己成功插入玉米基因姐中，并且稳定表达。本实验成功获得了转基因植株，验证了ＬＥＡ８９８１在玉米中的抗旱功能，并对转化体系进行了优化，这有利于ＬＥＡ蛋白抗逆性的研究，并且为定向改良饲喂玉米提供了新方

7、向。关键词：饲喂玉米，ＬＥＡ蛋白，抗逆性，基因枪，农杆菌转化ＩＴｒａｎｓｆｏｒｍａ社ｏｎｏｆ化ｃ／／ｆｌＬＥ乂ＰｒｏｔｅｉｎＧｅｎｅ－Ｉｓｏｆｅｃｔｏｎ化ＭａｉｚｅＨｉＩａｎｄＡｎａｌｙｓｉＤｅｔｉＡｂｓ化ａｃｔｉｚｅｉｓａｎｉｍｏｒｔａｎｔｆｅｅｄｃｒｏａｎｄｉｔｉｓｉｄｌ出ｔｉｂｔ化６ｗｏｌｄ．ＤｒｈｔｌｄＭａｗｅｓｒｕｅｄａｒｏｕｎ过ｒｏｕｃｏｐｐ，，ｙｇｈｉｈｓａｌｉｎｉｔａｎｄｏｔｈｅｒａｂｉｏｔｉｃｓｔｒｅｓｓｅｓａｒｅａ

8、ｌｌｌｉｍｉｔｉｎｆａｃｔｏｒｓａｆｆｅｃｔｉｎｆｅｄｃｏｍｒｏｄｕｃｔｉｏｎ．Ｌａｔｅｇｙｇｇｐｅｍｂｒｏ衍ｌｅｓｉｓａｂｕｎｄａ打ｔｒｏｔｅｉｎｓＬＥＡｒｏｔｅｉｎｓａｒｅａｓｅｒｉ巧ｏｆｒｏｔｅｉｎｓｗｈｉｃｈａｃｃｕｍｕｌａｔｅｉｎｔｈｅｙｇ