刺激隐核虫（cryptocaryon irritans）类木瓜蛋白酶的初步研究

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2、ｔａｎｓ１．’．＇＝恭＊－／＞ｒ＇ｔ谢金珠ｒ，屬，．￥如＇’．．＼祝＾＇ｒ，Ｖ：１＇＾．片，．＼＼．挤５＇学科专业：发育生物学ｌ：＼ｉ纖研究方向；．，…遍虛分立生物證．．Ａ指导教师：黄晓纪教授＾Ｊ＂？＾■‘ｉ／４冰，论文提巧日期：２０巧年３月巧日ａ论文评阅人：Ｗ＼＾－论文答辩曰期：年月旧Ｗｙ－／答辩委员会主巧：＼］、ｒｒ学位授予单位：福建师范大学心‘ｙ＂？学位授予日期、：年月曰年

3、月觀京…－必＇＃尹如句．＇＾？：＾．：Ａ，‘？，．Ａ、ｉ如心：；＾乂１中文摘要刺激隐核虫是一种海洋寄生性纤毛虫，其生活史具有多态性，必须经历寄生＂＂于海水硬骨鱼体表的滋养体阶段，是引起海水白点病的病原生物。近年来随着养殖密度的増大，对海水养殖业造成的影响日益严重，引起了巨大的经济损失。目前的物理、化学防治方法均无法起到有效作用，因而亟待研巧出可行的防治方’’一法。本实验从Ｃａｐ／ｏｃｗｙｏｎＩｍｔｏｗ滋养体ｃＤＮＡ文库中筛选出个类木瓜蛋白’－ｏｔｅａｓｅＣ酶（ｐａａ

4、ｉｎｌｉｋｅｒｉＰＣＰ）的ｃＤＮＡ，通过５ＲＡＣＥ（ＲａｉｄＡｍｐ＂扫ｃａｔｉｏｎｏｆｐｐ，ｐ’５＊ＤＮＡｅｎｄｏｆｃ）方法获得完整开放阅读桓，对其进行分子特征分析，并初步评价了该蛋白对大黄鱼的免疫预防作用。ＣＷＣＰ开放阅读框（ＯｐｅｎＲｅａｄｉｎｇＦｒａｍｅ，９８４３２７个氨基酸．。ＯＲＦ）由ｂｐ碱基组成，编码，分子量理论值为巧６ｋＤａ实验中Ｗ人工合成的方式完成其中１４个非通用密码子的修改，获得适合在原核系户ＣＰＯＲＦ序’统表达的ａ列，并亚克隆出５端下游３０１ｂｐ之后编码成

5、熟酶结构域ＥＴ’６８４ＯｆＣ巧重组于ＢＬ２１ＤＥ３ｂ２８ａｃｏ／ｉ的ｐ碱基序列），ｐ载体后转化到（）（ｒＣｉＰＣＰｔ。ｒＣｉＰＣＰｔ，菌株，通过自诱导方式获得融合蛋白Ｗ免疫小鼠获得抗血清用于ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔｉｎｇ分析，结果表明该蛋白具有良好的免疫原性，可特异性识’’’ＣｍＹａｍ各时期的天然蛋白。ＩｍｔｏｗｉＰＣＰ经别Ｃ．Ｉ同时，该结果也说明Ｃ天然２６ｋＤａ左右的成熟酶。利用间接免疫巧光抗体试验对Ｃ．水解去除前肤，形成：＞７化ＷＳ幼虫时期的ＣｉＰＣＰ进行定位，结果显示该蛋白酶主

6、要分布于胞口，属于分泌型蛋白酶，与生物信息学预测结果相符。大黄鱼经抗原ｒＣｉＰＣＰｔ免疫后，获（４５０００ｅｒｏｎｔ得了对Ｃ的化》？致死剂量，ｔｈ／ｆｉｓｈ）的感染性幼虫攻击５４％的免疫ｌ－ＰＣＲ显示大黄鱼脾脏中的ｉｎｔｅｒｅｕｋｉｎｉ保护率，实时定量ｐ的表达上调。综合分’＂Ｃｍｔｏｗ感染具有一．ｚ海析，初步证明该蛋白对大黄鱼的定的免疫保护作用，为＂水白点病的防治研巧提供了线索。关键词：类木瓜蛋白酶！克隆；表达；免疫保护Ｉ英文摘要Ａｂｓｔｒａｃｔ＾化ｆｒｒｚＹ幻ｉｓ汪ａ

7、ｒａｓｉｔｉｃｃｉｌｉａｔｅｆｒｏｍｍａｒｉｎｅｗｈｉｃｈｃａｕ化ｓｍａｒｉｎｅｗｈｉｔｅｐ：，＇ｓｐｏｔｄｉｓｅａｓｅｏｆｆｉｓｈｉｔｓＨ耗ｃｃｌｅｉｓｃｏｍｐｌｅｘａｎｄｕｎｄｅｒｏｅｓａｒａｓｉｔｉｃｓｔａｅｉｎｌ：ｅｌｅｏｓｔ．，ｙ，ｇｐｇＡｓｔｈｅｉｎｃｒｅａｓｉｎｇｄｅｎｓｉｔｙｏｆｍａｒｉｎｅａｑｕａｃｕｌｔｕｒｅ，Ｃ．ｉｒｒｉｔａｎｓｓｐｒｅａｄｓｉｎｓｈｏｒｔｄａｙｓａｒｏｕｎｄａｖａｓｔｃｕｌｕｒｅａｒｅａｒｅｓ

8、ｕｈｉｎｉｎｈｕｅｅｃｏｎｏｍｉｃｓｔｔ．Ｗｈｉｌｅｉｌａｅｇｇｌｏｎｏａｖａｂｌ＇ｅｆｅｃｔｉｖｅｍｅｔｈｏｄ化ｒｅｖｅｎｔ化ｅｆｉｓｈ出ｓｅａｓｅｓｏｉｔｓｕｒｅｎｏｄｅｖｅｌｏａｒｏａｅｐ，ｇｔｔｐｐｐｐｒｉｔｔｃｏ－ｈｏｄ化ｎｔｒｏｌ化ｅｄｉｓｅａｓｅＡｉｍｅ．ｅ打ｅ