刺激隐核虫（cryptocaryon irritans brown 1951）在卵形鲳鲹（trachinotus ovatus）上的传代及免疫应答反应

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1、中山大学硕士学位论文刺激隐核虫（CryptocaryonirritansBrown1951）在卵形鲳鲹（Trachinotusovatus）上的传代及免疫应答反应姓名：滕楠申请学位级别：硕士专业：水生生物学指导教师：李安兴20050606论文题目：刺激隐核虫CryptocaryonirritanBrown1951在卵形鲳鳇Trachinotusovatus上的传代及免疫应答反应专业：水生生物学硕士生：滕楠指导老师：李安兴副教授摘要刺激隐核虫是一种遍生性纤毛虫，寄生于热带、亚热带海水鱼类身上引起“白点病”。近年来在中国南海海水养殖区“

2、白点病”年年爆发，对海水养殖业造成了很大损失。本论文对刺激隐核虫在实验室条件下对卵形鲳鲣的感染、传代程序进行了深入研究，并探索了刺激隐核虫的幼虫经不同途径免疫卵形鲳鲣后，引起的免疫反应及规律。以往在对刺激隐核虫的研究中发现，要大量获得该虫作为实验材料十分困难。因此为了获得充分的实验材料，我们对刺激隐核虫在实验室条件下的感染模式进行了探索。卵形鲳鲣是中国南海区域养殖的重要经济鱼类，极易感染该虫。用亚致死量的发育整齐的刺激隐核虫幼虫感染卵形鲳鳕的鳃和皮肤，在优化的实验室条件下成功地建立起了感染和传代的体系。根据刺激隐核虫的生活史规律对感

3、染和传代的每一个步骤进行了标准化：在水温27±O．5"C、盐度29-32‰条件下，用2h(小时均用h表示)内自然脱胞的幼虫按10000～15000幼虫／每尾鱼的剂量在黑暗中感染鱼体3h，60h后鱼皮肤和鳃上出现明显可见的滋养体，24h内几乎所有的滋养体都从鱼体上脱落，用专门的收虫器收集脱落的成熟滋养体。60h后，由成熟的滋养体发育而成的分裂前体开始放出幼虫，并于第二天晚上达到高峰，此时收集幼虫进行下～轮感染，幼虫在22：00～04：00孵化产率最高。完成一轮上述循环刚好用时1周，一轮循环可以收到约1．OX107个(标准化数字)幼虫，

4、产率最高达到122倍。幼虫脱胞后存活时问最长达到了36h以上。脱胞半小时内的幼虫感染率达到64．6％，4h后的感染率显著下降，8h后的感染率仅有9．6％。我们用卵形鲳鳕作为宿主鱼体，成功建立了刺激隐核虫传代的标准方法。这个稳定的感染传代体系至今已经维持了40代(10个月)。在前面研究的基础上，进一步对刺激隐核虫引起宿主鱼体的免疫应答规律进行了研究。用刺激隐核虫幼虫对卵形鲳鳇分别采用三种方式进行免疫：体表感染活幼虫，腹腔注射组活幼虫和腹腔注射组死幼虫。免疫剂量分别为1．0X104体表感染，1．0x】04腹腔注射和15．O×104腹腔注

5、射(幼虫／尾鱼)。免疫后的保护效果通过三个指标来测定：相对感染强度(RIL)，相对保护强度(RPL)和阻动效价。发现每种方式都能对宿主产生免疫保护，用相同剂量1．0X104(幼虫／尾鱼)免疫鱼，体表感染所产生的保护性比活虫注射强。血清抗体效价与相对保护强度和宿主保护性之间都存在着显著的正相关性，但是皮肤抗体效价与相对保护强度和血清效价之间都没有相关性。因此，我们认为皮肤的粘膜免疫反应与系统免疫反应是相对独立的。目前，在生产中治理刺激隐核虫的方法主要是化学方法和物理方法，但这些方法很难有效地杀灭改虫，并且容易造成水体和鱼体的污染，而用

6、免疫的方法预防该虫相比之下更为安全有效。因此，研制出刺激隐核虫疫苗，就成为较为理想的防治该虫的方法。本文建立了在实验室条件下刺激隐核虫感染动物模型，并在前人的基础上，进一步摸索了该虫引发宿主鱼体的保护性，使我们进一步了解了海水硬骨鱼类抗刺激隐核虫免疫的机制。在此基础上，可进一步研究刺激隐核虫引发宿主免疫保护性的抗体产生规律，以期早日研制出刺激隐核虫疫苗。关键词：刺激隐核虫、卵形鲳鳇、传代、免疫nThesis：ThePassageofCryptocaryonirritansandElicitedImmuneResponseinaCul

7、turedMarinePompano：TrachinotusovatusMajor：HydrobiologyName：TengNanAbstractCryptocaryonirritansBrown1951isaholotrichousciliatethatparasitizesmarinefishintemperateandtropicarea．HighmortalitiesandheavyeconomiclosscausedbythisparasiteinculturedmarinefishofSouthChinahavebee

8、nreportedinrecentyears．ThepresentstudyaimstoestablishastandardizedprocedureforthelaboratorymaintenanceofCirritans，and