人工诱导棕点石斑鱼雌核发育

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1、学校代码：学号：分类号：密级：墙為大硕士学位论文题目：人工诱导棕点石斑鱼雌核发育作者：樊佳伟指导教师：路剑副教授专业：水产养殖学时间：二一五年五月InducedGynogenesisinBrown-marbledGrouper(Epinephelusfuscogutatus)AThesisSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementFortheMasterDegreeinAquacultureByFanJia-weiSupervisor:LuoJian

2、Major:AquacultureSubmittedtime:May,2015海南大学学位论文原创性声明和使用授权说明原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品或成果。对本文的研宄做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律结果由本人承担。论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权说明本人完全了解海南大学关于收集、保存、使用学位论文的规定，即：学

3、校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。学校可以为存在馆际合作关系兄弟髙校用户提供文献传递服务和交换服务。本人授权海南大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密论文在解密后遵守此规定。论文作者签名：导师签名：日期：虞年月么日日期：許月乙日本人已经认真阅读“高校学位论文全文数据库发布章程”，同意将本人的学位论文提交“高校学位论文全文数据库”中全文发布，可按“章程”中规定享受相关权益。

4、同意论文提交后滞后：口半年：口一年：年发布。论文作者签名：导师签名：曰期：年月么曰曰期：装月）曰摘要石斑鱼是热带名贵海水鱼类，近二十年来，在我国广东、福建、海南和台湾等省份己形成大规模的养殖产业，但由于石斑鱼采用“野种家养”繁殖模式，导致养殖群体生产性能下降、病害频发，己成为制约该产业可持续发展的瓶颈因素之一。选择何种良种选育策略是石斑鱼育种的关键问题之一，由于石斑鱼是先雌后雄的天然性反转鱼类，其性成熟时间较长，如果完全采用常规家系选育的手段，则需要耗费相当长的时间。人工诱导雌核发育是高效的细胞学

5、育种手段，一代雌核发育相当于代自交选育的效果，能够大大缩短优良纯系的培育周期。本实验以綜点石斑鱼为研究对象，开展棕点石斑鱼人工诱导雌核发育条件摸索、微卫星鉴定及染色体核型分析等研宄工作，为棕点石斑鱼的人工诱导雌核发育育种奠定了基础。具体研究如下：、本研宄采用异源精子的策略诱导雌核发育，以鞍带石斑鱼义本’棕点石斑鱼为母本，鞍带石斑鱼精子经紫外线遗传灭活后刺激棕点石斑鱼卵子发育；采用冷休克的方法使棕点石斑鱼卵子遗传物质二倍化，获得活力正常的人工雌核发育后代。本研究对精子灭活条件、冷休克起始时刻、冷休克

6、处理温度、冷休克持续时长等条件进行了筛选。结果显示用紫外剂量处理精子，采用°的冷休克温度，在卵子受精后第冷休克处理可以获得相对较高的雌核发育孵化率±。、采用微卫星分子标记技术对人工诱导雌核发育石斑鱼群体进行亲子鉴定。从个微卫星位点中筛选了具有父母本差异、稳定扩增的个微卫星位点、、、和，采用非变性聚丙酰胺凝胶电泳及毛细管电泳技术鉴定子代群体的扩增产物。结果显示：在这个位点上，所检测的尾随机子代个体均不含有父本遗传物质，微卫星位点信息与母本棕点石斑鱼吻合。微卫星分析结果证明了本研宄摸索的棕点石斑鱼人工

7、雌核发育诱导技术的可靠性。、采用染色体肾细胞制片技术对人工诱导雌核发育石斑鱼进行染色体核型分析。结果显示，所检测子代个体染色体核型为，，染色体的大小、形态、着丝粒位置均与己报道棕点石斑鱼核型研究相同，子代均为雌核发育个体。染色体核型结果也证明了本研宄成功获得了人工诱导雌核发育棕点石斑鱼群体。关键词：棕点石斑鱼；雌核发育；冷休克；微卫星；染色体核型AbstractGroupers，，，，，，士°、目录弓言石斑鱼养殖与种质研究概况石斑鱼研宄概况石斑鱼种质资源状况石斑鱼育种策略的选择雌核发育天然雌核发育

8、人工雌核发育精子遗传物质失活单倍体卵子遗传物质二倍化雌核发育后代的鉴定形态学鉴定染色体核型鉴定分子生物学标记鉴定微卫星分子标记鉴定染色体核型鉴定人工诱导雌核发育存在的问题人工诱导雌核发育的意义本研究的目的和意义椋点石斑鱼雌核发育诱导条件的研究实验材料材料来源实验仪器实验试剂实验方法精子最佳灭活条件实验冷休克起始时刻实验冷休克温度和冷休克持续时间实验数据处理实验结果冷休克最佳起始时刻最佳冷休克温度和冷休克持续时间单倍体、正常二倍体、雌核发育二倍体鱼苗形态比较讨论棕点石斑鱼雌核发育后代