基于活的但非可培养细菌降解毒死蜱及其酶降解效果

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1、学校代码１０３４５巧《类型基媒巧巧．、’、．ｒ？、＇■■申Ａ｜：：＿，Ｙ於＾大變＾巧絶１２１ＺＨＥＪＩＡＮＧＮＯＲＭＡＬＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ＇－．；．＼＇．、．．？硕去学位论文‘‘严Ｍ．，Ｖ‘■＇、乂Ａ．？．＜．｝Ｉ嘶；题目；基子活的但化可培养细茜降解责死魄及真酪隐解效累＾＞’一－‘一＾．庐Ｖ，為吟＇紙．？’．Ｗ．二‘．．—＇‘－■－’三去＾兵．－．：击．，；＾―Ｖ六＇心砸，：，，鳴咕’’，一．＇：‘．．．：＾‘

2、－：‘．．．．，学科专业自钱化理学．，．占互１￡；ＶｒＶ年级‘＾；２０１２级學号；２０１２２１０５８７媛争＇■广＾４；二本＇研究生：吴咯參指导教师；了林贤Ｕ每．‘＇Ｖ．‘中留分类号；０９３８．１论文提交时间；２０１５年１月１１日裹’－．，讀转■—－一，．，户、－＇——．＇＇汽Ｖ：？－，３．，：，。■；ｘ■？？？＇？＜ｖ■＊？？－＂．．；．：１巧去々住化Ａ基于活的但非可培养细窗泽解秦死坪及其巧降解效果指导教师姑乂、职棘了抹贤教授单

3、位地址浙江师范大学地理与巧境学院申请學位级别巧壬专业自然地巧學论文提交时间２０１５年３月论文答辩时间２０１５年５月学位授予单位和曰期浙狂师范大學（２０１５年６月）答辩委员会主席论文评阔人２０１５年５月１５目ＴｈｅｓｉｓｆｂｒＭａ巧ｅｒＢＡＳＥＤＯＮＴＨＥＬＩＶＩＮＧＢＵＴＮＯＴＣＵＬＴＵＲＡＢＬＥＢＡＣＴＥＲＩＡＤＥＧＲＡＤＡＴＩＯＮＯＦＣＨＬＯＲＰＹＲＩＦＯＳＡＮＤＩＴＳＥＮＺＹＭＥＤＥＧＲＡＤＡＴＩＯＮＥＦＦＥＣＴＭａｏｒ；Ｐｈｓｉｃａｌｅｏｒｉａｈｊｙｇｇｐｙ

4、ＮａｍｅｏｆＰｏｓｔｒａｄｕａｔｅ：ＷｕＤｏｎｄｏｎｇｇｇＡｄｖｉｓｅｒ：ＤｉｎｇｉｎｘｉａｎＬＺｈｅｊｉａｎＮｏｒｍａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｇｙＪｉｎｈｕａ，Ｚｈｅｊｉａｎｇ，ＣｈｉｎａＭａ２０１５ｙ，基于活的但非可培养细菌降解毒死蜗及其酶降解效果摘要我们运用传统的微生物纯培养方法从活性污泥、±壤、河水、沉淀物、海水－等自然界环境中分离得到的微生物总数只占自然界的化〇１％１〇％，然而自然界中还有９０％Ｗ上的微生物未被人们所广泛的了解和认识，其处于未培养或活的但非ｖ－可培养状态ｉａｂｌｅｂｕｔｎ

5、ｏｎｃｕｌｔｕｒａｂｌｅ，ＶＢＮＣ）。近几年来随着各种生物研究技术（和研究方法的发展进步，给人类认识更多的活的但非可培养状态菌提供了各种各样的可能性，研究者们对于ＶＢＮＣ状态茵的研究也逐渐给予更多的关注和重视。依靠非培养手段仅仅只可Ｗ获取有关茵群的姐成信息及微生物多样性，现代微生物的多样巧Ｗ及各种环境学功能的研究仍然受到许多条件的局限性。本文研究应用ＭＰＮｍｏｓｔｒｏｂａｂｌｅｎｕｍｂｅｒ法Ｒｆ（ｒｅｓｕｓｃｉｔａｔｉｏｎ（ｐ），通过添加复苏促进因子ｐｒｏｍｏｔｉｎｆａｃｔｏｒ）ＶＢＮＣｐｇ，从新疆主壤及制药废水系统中分离

6、得到可培养化（活的非可培养）细菌。其中筛选出１４株具有潜在有机磯农药毒死碑降解功能的ＶＢＮＣ菌株，运用常规培养法筛选島效毒死婢降解菌及其降解酶，探索适宜的菌株对毒死婢的降解条件和酶降解条件的优化。主要研究内容如下：１．应用ＭＰＮ法，通过添加藤黄微球菌分泌的复苏促进因子Ｒｐｆ，从制药废水及新疆±壤系统分离得到可培养化ＶＢＮＣ细茜。通过生物形态学观察和１６ＳｒＤＮＡ序列分析方法，从而判定分离纯化得到的ＶＢＮＣ菌株所归属的相关属种。然后进一步阅读，查阅有机憐农药毒死蜗降解茵株的相关文献报道，综合分析归纳毒死婢降解菌株的系统关系，初步筛

7、选出近缘的１４株ＶＢＮＣ菌做为毒死蜡降解菌种的研究对象。２．从Ｃ其中筛选出１４株具有潜在毒死蜡降解功能的ＶＢＮ菌株，进行毒死峭降解实验的研究，其中菌株ＣＨＺＹＲ６３在富营养培养液的条件下对毒死碑的生物降解能力最强，Ｗ炎光假单胞菌（Ａｃｍ沈ｗ７〇ｍｗ／７Ｍ〇ｒｅｙｃｍｓＣＨＺＹＲ６３作为研究的＿）、出发菌株－ｅｓｎ，对其进行实验设计运用ＢＢＤ〇ＢｏｘｂｅｈｎｋｅｎＤｉｇ响应面法，对毒死）婢降解菌ＣＨＺＹＲ６３的降解条件进行优化。结果显示，ＣＨＺＹＲ６３菌株的最优Ｉ摘要°降解条件为：在毒死峭初始浓度为１３１ｍｇ／Ｌ，温度为

8、＾Ｃ，ｐＨ值为９，培养液