不同临床型别孢子丝菌与细胞外基质蛋白粘附力的研究

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1、不同临床型别孢子丝菌与细胞外基质蛋白粘附力的研究AdhesionofdifferentclinicalformsofSporothrixtoextracellularmatrixproteins作者姓名：毕云斐领域（方向）：皮肤病与性病学指导教师：李福秋教授类别：临床医学硕士答辩日期：2015年5月22日中文摘要不同临床型别孢子丝菌与细胞外基质蛋白粘附力的研究孢子丝菌病(sporotrichosis)是由孢子丝菌(Sporothrix)感染引起的一种皮肤科较常见的良性亚急性或慢性深部真菌病，该病不仅可引起皮肤病变，亦可导致粘膜、骨骼甚至内脏等系统性病变。孢子丝菌

2、病的临床表现与真菌感染的严重程度有关，主要取决于病原真菌的数量、真菌的毒力、伤口处理方法及机体免疫力强弱等。目前已有大量研究证明孢子丝菌的细胞壁成分与宿主细胞外基质蛋白之间的粘附力为致病真菌的致病毒力之一。可以粘附的细胞外基质蛋白包括:Ⅱ型胶原、层粘连蛋白、纤维连接蛋白、纤维蛋白原、凝血酶致敏蛋白等。孢子丝菌的酵母相和菌丝相均可明显的粘附于Ⅱ型胶原、层粘连蛋白及纤维连接蛋白，但分生孢子无明显粘附于纤维蛋白原及凝血酶致敏蛋白的证据，而酵母细胞则可以粘附于纤维蛋白原。Lima等已通过间接免疫荧光法及流式细胞术证实了孢子丝菌菌丝及酵母细胞的这种粘附能力。孢子丝菌细胞壁

3、成分对细胞外基质蛋白的粘附作用在传播疾病的过程中发挥了关键的作用，因此探索这种粘附力与孢子丝菌致病毒力之间的关系，有助于对孢子丝菌病发病机制的研究。I目的：通过将不同临床型别孢子丝菌菌株于相应培养皿中适当温度下培养后，分别与不同细胞外基质蛋白结合，并进行间接免疫荧光检查，荧光的强弱可反映出致病真菌与细胞外基质蛋白粘附力的强弱，进而初步分析这种粘附力于菌株致病毒力之间的关系。方法：将60株孢子丝菌临床分离菌株（固定型30株，淋巴管型30株）在沙氏培养基上25℃室温培养2周，另外60株（固定型30株，淋巴管型30株）在脑心浸液琼脂培养基上37℃培养1周后转种于另一脑

4、心浸液琼脂培养基上，如上方法共传代3次,将上述培养菌株制作成菌悬液，分别与纤维连接蛋白及层粘连蛋白结合，加入相应特异性抗体后应用间接免疫荧光法进行荧光染色，通过免疫荧光显微镜观察荧光强弱，根据各组的阳性率及弱阳性率进行分级，统计各组各级的例数及占总例数的比例，最后测得资料应用统计学软件进行分析。结果：实验菌株在沙氏培养基上25℃及脑-心浸液培养基上37℃均生长迅速。沙氏培养基3-4天即可见菌落生长，呈淡褐色或乳白色湿润、光滑、酵母样菌落。2周时菌落直径明显增大，颜色加深呈深褐色，边缘隆起，出现褶皱、绒毛样菌落；脑心浸液琼脂培养皿上1周即长出乳白色菌落，呈圆形小斑

5、块,2周时逐渐融合成膜状。分别II将不同传代时间及传代次数的酵母相菌落制作成菌悬液并涂片于光镜下观察,可以发现,随着传代时间延长及传代次数增加,菌丝相转化为酵母细胞的数目明显增多。将120株孢子丝菌分为8小组，制成菌悬液后分别与相应细胞外基质蛋白结合，根据每组的阳性率及弱阳性率进行分级，应用统计学软件对各组各级的例数进行分析，差异有统计学意义（P＜0.05）,菌丝相及酵母相淋巴管型与纤维连接蛋白及层粘连蛋白结合荧光的阳性率均高于固定型；但菌丝相及酵母相同型别之间分别与2种蛋白结合荧光阳性率均无明显差异。结论：将孢子丝菌菌丝相转化为酵母相，随转化时间延长及转种次数

6、增多，酵母细胞的数目明显增多。孢子丝菌菌丝相及酵母相淋巴管型与纤维连接蛋白及层粘连蛋白的结合能力均强于菌丝相固定型；菌丝相及酵母相同型别之间分别与2种蛋白结合荧光阳性率均无明显差异。关键词：孢子丝菌，孢子丝菌病，细胞外基质蛋白，粘附力IIIAbstractAdhesionofdifferentclinicalformsofSporothrixtoextracellularmatrixproteinsSporotrichosisisacommonbenignsubacuteorchronicdeepmycosisindermatologywhichiscaused

7、bySporothrix.Thisdiseasenotonlycancauseskinlesions,butalsocanleadtomucousmembranes,bonesandeveninternalorgansandothersystemicdiseases.TheclinicalmanifestationsofSporotrichosisisrelatedtotheseverityoffungalinfections,itmainlydependsonthenumberofpathogenicfungi,fungalvirulence,thetreat

8、mentofthewou