辣椒炭疽病的生防细菌筛选与活性测定

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1、^s«f編:藤錄雜硕士学位论文'D.'秘、辣椒炭疽病的生防细菌筛选与活性测定作者姓名金山学科专业植物保护指导教师黄江华教授曾大兴教授所在学院农学院论文提交日期2015年5月23日分类号：S4学校代号：11347学号：20132095104004仲恺农业工程学院硕士学位论文辣椒炭疽病的生防细菌筛选与活性鉴定作者姓名：金山指导教师姓名、职称：黄江华教授曾大兴教授学科专业名称：植物保护研究方向：植物病理论文提交曰期：年月曰论文答辩日期：年月曰学位授予单位：仲恺农业工程学院学位授予日期：年月日答辩委员会成员：主席:差孑為委员：%三学位论文原创性声明本人声明所呈交

2、的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研究成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。作者签名：円期：/指导教师签名：日期：学位论文版权使用授权书本人完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意学校将本人的学位论文提交清华大学中国学术期刊（光盘版)电子杂志社全文出版和编入CNKI《中国知识资源总库

3、》，传播学位论文的全部或部分内容。（保密的论文在解密后应遵守此规定）本学位论文属于：□保密，在_____年解密后适用本授权书。不保密，同意在校园网上发布，供校内师生和与学校有共享协议的单位浏览。(请在以上相应方框内打“V”）作者签名:H期:滅.夂)指导教师签名:円期：DIdentificationandMeasurementofActilityofAntagonisticMicrobestoColletotrichumcapsiciADissertationSubmittedfortheDegreeofMasterCandidate：ShanJinSup

4、ervisor：Prof.JianghuaHuangProf.DaxingZengZhongkaiUniversityofAgricultureandEngineeringGuangzhou,China摘要炭疽菌属(ColletotrichumCda.)引起植物炭疽病，分布广泛、危害严重。辣椒炭疽菌(C.capsici)是该属的重要种之一，主要危害果实和叶片，对农林生产有严重影响。芽孢杆菌因能诱导植物产生抗病物质等特点，广泛应用于辣椒炭疽病的防治中。本文应用形态和分子特征对该菌进行鉴定，并开展了抑菌机理、产生活性物质的培养条件及抗菌物质的分离、纯化和鉴定

5、等研究。实验结果如下：1.采用载片培养法从前期获得的22个菌株中快速筛选到4株（B7、B20、B22、B23）抑制辣椒炭疽菌孢子萌发和8株（B1、B2、B3、B4、B10、B11、B17、B18）抑制辣椒炭疽菌附着胞形成的生防菌株，通过形态特征、16SrDNA序列分析进行鉴定，将B1、B2、B3、B4、B7、B10、B11、B17和B18菌株鉴定为枯草芽孢杆菌，B20、B22和B23菌株与枯草芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌都有极高的同源性，其分类地位有待进一步确定。2.采用平板对峙培养法对生防菌株进行抗菌谱测定，结果表明：抑制辣椒炭疽菌孢子萌发和抑制辣椒炭疽菌

6、附着胞形成的生防菌株都能明显抑制辣椒炭疽菌、稻瘟病、拟茎点霉等重要病原菌的生长，抑菌率均达到50%以上。3.采用硫酸铵饱和度沉淀法分离抑制孢子萌发的生防菌株的发酵液中的活性蛋白组分，生测结果表明4个菌株的蛋白粗提液可100%抑制辣椒炭疽菌孢子萌发。进一步对粗提液用SephadexG-75葡聚糖凝胶柱层析进行分离纯化，并通过载片培养法测定蛋白纯化物的生物活性。可以发现，B7菌株的第一个峰值处可完全抑制辣椒炭疽菌的孢子萌发。其余峰段的收集样品基本不影响孢子萌发和菌丝生长，但可抑制附着胞形成。采用20%-30%、30%-40%、40-70%硫酸铵饱和度分级沉淀

7、法分离抑制附着胞形成的生防菌株发酵液中的活性蛋白组分，生物测定结果表明8个菌株的蛋白粗提液可100%抑制辣椒炭疽菌附着胞的形成。进一步对粗提液用SephadexG-75葡聚糖凝胶柱层析进行分离纯化，并通过载片培养法测定蛋白纯化物的生物活性，可以发现，20%饱和度沉淀的蛋白粗提液对附着胞的抑制效果最佳。关键词：生物防治；辣椒炭疽菌；枯草芽孢杆菌；活性测定IAbstractColletotrichumcausedplantanthraxwidespreadlyandseriousharmly.C.capsiciisoneoftheimportantspeci

8、esofthisgenus.Ithasmainlyharmfulonfruits