三七“熟制补血”的炮制原理及皂苷转化机制研究

《三七“熟制补血”的炮制原理及皂苷转化机制研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、成都中医药大学博士研究生毕业论文学位论文三七“熟制补血”的炮制原理及皂苷转化机制研究Processingmechanismof“goodatreplenishingbloodafterprocessing”ofPanaxnotoginsengandthetransformationmechanismofitssaponins黎江华指导教师姓名：吴纯洁申请学位级别：博士研究生专业名称：中药制剂学论文提交时间：2018.4论文答辩时间：2018.5二〇一八年五月成都中医药大学博士研究生毕业论文1摘要三七为

2、五加科植物三七Panaxnotoginseng(Burk.)F.H.Chen的干燥根和根茎，传统功效为治疗各种出血证及跌打损伤，瘀滞肿痛。历代本草记载，三七有“生、熟”之分，素有“生消熟补”之说，即生三七能止血祛瘀、消肿止痛；熟三七则能补血、补气。目前，对于三七的研究以生三七为主，而对于三七炮制品的研究尚不够深入，与熟三七补血作用相关的物质基础及机理尚无定论。目的：通过建立血虚小鼠模型评价三七“熟制补血”作用，筛选其发挥补血作用的有效部位，并初步鉴定有效部位中化学成分；系统分析有效部位中主要化学成分（

3、皂苷类成分和非皂苷类成分）在炮制前后的变化，明确炮制对化学成分的影响；并通过机体血细胞的生成、造血细胞因子mRNA水平和蛋白水平表达、骨髓组织病理学来探究熟三七及其有效部位补血作用机理，初步阐明三七“熟制补血”的炮制原理。同时，采用中药模拟炮制法系统分析皂苷类成分的转化机制及影响因素，并结合药效学进行验证，进一步明确皂苷类成分的转化机制（途径），为熟三七饮片的合理炮制工艺及质量控制提供依据。方法：1.三七“熟制补血”的作用及有效部位研究：建立环磷酰胺（CTX）致血虚小鼠模型，以外周血象（WBC数、RB

4、C数、HGB数、PLT数）、脏器指数（胸腺指数与脾脏指数）和骨髓有核细胞数（BMNC）为评价指标，评价生三七与熟三七补血作用；同时，采用系统提取分离法来制备熟三七不同极性部位，并以建立的血虚小鼠模型筛选其发挥补血作用的有效部位。2.三七炮制前后的化学成分分析：通过化学成分预试、HPLC图谱对比分析熟三七补血作用有效部位中化学成分及变化情况；通过HPLC-ESI-LTQ-OrbitrapMS/MS分析炮制对三七皂苷类成分种类改变的影响；并对有效部位中非皂苷类成分（多糖）进行研究，分析炮制前后非皂苷类成分

5、（多糖）的单糖组成、分子量分布及官能团等方面的差异。3.三七“熟制补血”作用机理研究：以机体血细胞的生成（WBC数、RBC数、HGB[课题来源]国家自然科学基金青年科学基金项目：基于补血活性的三七“生消熟补”的物质转换及炮制机理研究（No.81503254）。I成都中医药大学博士研究生毕业论文+数、PLT数、BMNC数、DNA含量及CD34抗原表达）、造血相关细胞因子mRNA水平和蛋白水平的表达（GM-CSF、IL-3及TNF-α）、骨髓组织病理学及免疫功能（胸腺指数与脾脏指数、IgG、IgM）为指标

6、，探究三七“熟制补血”的作用机理。4.三七皂苷类成分转化的影响因素分析：采用不同加热处理方法（烘烤与蒸制）考察三七中皂苷类成分的热稳定性，探讨在炮制过程中影响皂苷转化的因素；选取三七总皂苷（PNS）、三醇皂苷（PTS）、二醇皂苷（PDS）及单体皂苷（Rg1、Rb1）采用模拟炮制法分析验证影响其转化的因素。5.三七皂苷类成分转化机制研究：选择在与皂苷共存情况下，能改变环境pH值的氨基酸和低分子有机酸为切入，分析其在炮制过程中的变化情况；选择变化明显的氨基酸和低分子有机酸为研究对象，采用中药模拟炮制方法考

7、察其对PNS、PTS、PDS及单体皂苷成分的催化转化能力，并对比分析氨基酸和低分子有机酸催化三醇型皂苷（R1、Rg1及Re）和二醇型皂苷（Rb1、Rd）的转化机制（途径）及异同点。6.三七皂苷及其模拟炮制产物补血作用研究：通过建立的CTX致血虚小鼠模型，以外周血象（WBC数、RBC数、HGB数、PLT数）、脏器指数（胸腺指数与脾脏指数）和骨髓有核细胞数（BMNC）为评价指标，验证三七皂苷类成分（PNS、PTS和PDS）及其模拟炮制产物的补血作用。结果：1.熟三七和生三七均能升高CTX致血虚小鼠的WBC

8、数和BMNC数，表明两者均能改善CTX致的血虚状态；与生三七相比，浓度为1.5g/kg、3.0g/kg时，熟三七升高WBC数的能力更强，表明熟三七补血作用明显优于生三七。且熟三七升高胸腺指数的能力更强，说明熟三七能通过调节免疫功能改善血虚症状。熟三七乙酸乙酯部位、正丁醇部位及水提部位均能升高CTX致血虚小鼠的WBC数、BMNC数及胸腺指数，表明这3个极性部位为熟三七发挥补血作用的有效部位。2.通过有效部位化学成分预试、HPLC图谱对比分析，发现三七经蒸制