胃癌mirna表达谱的鉴定及mir-374b-5p的功能研究

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1、分类号密级UDC编号硕士学位论文胃癌miRNA表达谱的鉴定及miR-374b-5p的功能研究研究生姓名：谭志慧指导教师姓名、职称：李国庆教授学科、专业名称：内科学研究方向：消化道肿瘤2013年5月万方数据南华大学学位论文原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南华大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。本人

2、完全意识到本声明的法律结果由本人承担。作者签名：年月日南华大学学位论文版权使用授权书本学位论文是本人在南华大学攻读（博/硕）士学位期间在导师指导下完成的学位论文。本论文的研究成果归南华大学所有，本论文的研究内容不得以其它单位的名义发表。本人同意南华大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保留学位论文；学校可根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文。同意学校将论文加入《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》，并按《中国

3、优秀博硕士学位论文全文数据库出版章程》规定享受相关权益。同意授权中国科学信息技术研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。对于涉密的学位论文，解密后适用该授权。作者签名：导师签名：年月日年月日万方数据目录中文摘要………………………………………………………………….1英文摘要………………………………………………………………….3前言……………………………………………………………………….5第一部分胃癌miRNA表达谱的鉴定材料和方法……………………………………………………………8结

4、果……………………………………………………………………14讨论……………………………………………………………………21第二部分miR-374b-5p的功能研究材料和方法…………………………………………………………23结果…………………………………………………………………29讨论…………………………………………………………………37结论……………………………………………………………………39参考文献………………………………………………………………40综述……………………………………………………………………….44在读硕期间发

5、表的论文………………………………………………….50主要英文缩略语索引…………………………………………………….51致谢……………………………………………………………………….53万方数据胃癌miRNA表达谱的鉴定及miR-374b-5p的功能研究中文摘要研究生：谭志慧导师：李国庆教授目的:通过鉴定与人胃癌密切相关的microRNAs(miRNAs)表达谱，初步筛选出在人胃癌细胞株中高表达的miRNAs；探讨miR-374b-5p、RECK与胃癌侵袭转移生长的关系，进一步阐明miR-374b-5p在胃癌发生、发展中的可能机

6、制。方法:1.体外培养人胃癌细胞株SGC-7901、MGC-803、NCI-N87和正常胃黏膜上皮细胞GES-1，分别提取总RNA进行miRNA芯片分析；qRT-PCR技术验证部分差异表达的miRNA。2.通过生物信息网络平台预测目的miRNA的作用靶点。设计合成has-miR-374b-5pASODA，将其转染于人胃癌细胞株MGC-803，以空载体和无关寡核苷酸序列为对照。qRT-PCR检测转染效率；CCK-8法观察胃癌细胞转染后的生长情况；Trans-well小室法和划痕试验观察胃癌细胞转染后的侵袭和迁移影响；qRT-

7、PCR验证RECK表达变化；WesternBlot法验证RECK蛋白表达。结果:1.微阵列芯片可见，相对正常胃粘膜细胞GES-1，共有115个miRNAs在胃癌细胞株中存在两倍及以上差异表达；其中在NCI-N87细胞中27个miRNAs表达上调、25个miRNAs表达下调，在SGC-7901细胞中21个miRNAs表达上调、8个miRNAs表达下调，在MGC-803细胞中19个miRNAs表达上调、15个miRNAs表达下调。选取MGC-803细胞中上调表达的miR-374b-5p、miR-182-5p、miR-15-5p

8、进行qRT-PCR验证，证明芯片结果基本可信。miR-374b-5p在MGC-803细胞中明显高表达。2.通过生物信息学分析发现，RECK可能为miR-374b-5p的靶基因。MGC-803细胞1万方数据以Lipofectamin2000为转染试剂时，其转染效率在80%左右。转染miR-374b-5p抑