肌小节z线蛋白cypher泛素化降解的初步研究

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1、丛』!芷丝绫蛋自￡Y卫塾里!湮盍丝隆簋鲍翘生珏究⑧论文作者签名：翌翘指导教师签名：左堑鱼篓论文评阅人1：评阅人2：评阅人3：评阅人4：评阅人5：答辩委员会主席：委员l：委员2：委员3：委员4：委员5：答辩日期：2Q1315129浙江大学研究生学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得迸’江盘鲎或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的

2、任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：彳釉签字日期．--扩l}年s月弓J日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解逝鋈盘堂有权保留并向国家有关部门或机构送交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权迸姿盘鲎可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：尹签字日期：砂}；年亨月弓J日导师签名：7勿哆<泅签字日期：伊‘多年厂1孑)日浙江大学硕士学位论文

3、致谢时光荏苒，岁月如梭，两年多的硕士学习生活已经接近尾声。回首过去的时光，我深深体会到科研的艰辛，同时也享受着科研所带来的快乐。在此过程中，是老师们为我指明方向，指点迷津；是各位同学给予我帮助，不吝赐教；是我的亲朋好友给予我关爱，为我营造最好的环境，提供最有力的支持。在此，向他们表示我最诚挚的谢意!首先，衷心感谢我的导师郭晓纲老师．在实验学习过程中，得到了郭老师悉心的指导，帮助我把握思路，熟悉实验，精心点拔。从实验记录，试剂标注等一些微小的细节上，郭老师都亲自嘱咐，严格要求。郭老师渊博的学识，一丝不苟的作风，

4、踏踏实实的精神，都让我受益匪浅。在生活方面，郭老师也给予我不断的鼓励和扶持。很庆幸遇到这么好的导师，在此，谨向我的导师郭晓纲老师表示最衷心的感谢和敬意!衷心感谢浙大基础医学系的柯越海教授和程洪强老师。由于课题部分内容在基础医学系完成，有幸得到了两位老师的指导和支持。两位老师对科研的理解，对科学的追求和热情，让我充分领略了科研的魅力。老师对我的包容和帮助，我都将铭记于心。感谢浙一医院心研所的孙坚老师，杨林师姐，王侃师兄给予我的帮助。感谢浙一心内科的潘艳云，涂世科，朱欢欢，丁洁等同学对我的指导。感谢基础医学系的李

5、硕敏，林长松，许勤勤，孙明姣，姚君琳，李悄然，徐琳，梁祖宇，张杰等同学在科研生活中带给我的指导和支持。和大家一起度过了美好的时光，建立了深厚的友谊，谢谢你们!最后感谢我的父母，是他们含辛茹苦养育了我，一直在背后默默支持我，给予我最无私的爱和关怀。谢谢你们，你们辛苦了!再次感谢所有老师，同学，亲朋好友，希望你们身体健康，永远幸福!尹翔2013年5月于浙大紫金港浙江大学硕士学位论文中文摘要肌小节Z线蛋白Cypher泛素化降解的初步研究浙江大学医学院硕士研究生导师内科学尹翔郭晓纲中文摘要细胞功能的完整性以及稳态的维

6、持都有赖于细胞内蛋白合成和降解的平衡。由于心肌处于不断的收缩舒张中，这种作用显得尤为重要。心肌收缩的基本单位是肌小节(Sarcomeres)，肌小节蛋白正常的自我更新功能对维持其结构和功能具有重要意义。肌小节z线蛋白以及胞质蛋白的过度积聚则会导致一些疾病的发生，如肌纤维性肌病(Myofibrillarmyopathy)。与其他器官组织类似，心肌肌小节蛋白的自我更新与泛素-蛋白酶体系统(Ubiquitin—proteasomesystem)f均功能密切相关。泛素．蛋白酶体介导的蛋白质降解通路控制着真核细胞内绝大

7、多数蛋白质的选择性降解，主要由两个过程组成，即蛋白的泛素化修饰以及泛素化修饰的蛋白被蛋白酶体识别并降解。该通路对于生命活动具有重要的调控意义。Cypher是一个含有PDZ和LIM结构域的蛋白，主要在横纹肌中表达，对于维持肌小节正常的结构和功能起重要作用。Cypher在心脏中特异性敲除可导致心功能的降低以及扩张性心肌病的发生。ZASP(z—bandalternativelySplicedPDZ—motifprotein)基因，即Cypher在人的对应基因，突变也可以导致人心肌肥大以及扩张性心肌病的发生。本课题旨

8、在进行肌小节z线蛋白Cypher泛素化降解途径的研究。首先利用酵母双杂交系统筛选与Cypher的ZM片段相互作用的泛素．蛋白酶体系统相关酶。通过成功构建诱饵质粒，文库筛选，序列比对，发现ZM片段能够与泛素化蛋白降解途径相关蛋白UBE2N(Ubiquitin-conjugatingenzymeE2N)以及USP48¨浙江大学硕士学位论文中文摘要(Ubiquitinspecificpeptidase48