猪圆环病毒2型与细胞自噬的相互作用

《猪圆环病毒2型与细胞自噬的相互作用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、分类号：S昼55：3密级：公矗单位代码：!鲤墨互学号：2Q!Q堡2垒猪圆环病毒2型与细胞自噬的相互作用InteractionBetweenPorcineCircovirsType2andAutophagy学位申请人：李红园指导教师：宋勤叶教授学科专业：预防兽医学学位类别：农学硕士授予单位：河北农业大学答辩日期：二。一三年六月一日独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得塑兰堡垒些盘鲎或

2、其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位敝作者雠多碉签字日期：例猝朋堋学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解塑兰堡盔些盘堂有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权塑韭盛些盘鲎可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：／毒荔砑导师签名：缘钐斗签字日期：卯

3、，≥年多月工日签字日期：卅J；年每月上日学位论文作者毕业后去向：工作单位：通讯地址：电话：邮编：摘要猪圆环病毒2型(porcineeircovirustype2，PCV2)可以引起猪的免疫功能抑制和持续性感染，其引起的猪圆环病毒相关疾病(PCVAD)是危害当今全球养猪生产的最重要的病毒性传染病之一，目前关于PCV2的致病机制仍然不清楚，因此深入探究PCV2致病机理十分必要。细胞白噬(Autophagy)在病原体感染过程中发挥着重要作用，与病毒的清除和逃避有关。本论文拟揭示PCV2感染诱导宿主细胞自噬的现象，分析细胞自噬在PCV2复

4、制中的作用，旨在从一个新视角为深入研究PCV2的致病机理奠定基础。用PCV2SD／2008株感染或经紫外线灭活后刺激PK-15细胞，运用透射电镜和激光共聚焦免疫荧光技术，分别检测细胞中的自噬囊泡和自噬体标志物LC3分子以及自噬降解底物p62蛋白的表达情况。结果显示，PCV2活毒及灭活后均能诱导PK-15细胞产生大量的双层膜和单层膜的自噬体样囊泡，显著提高自噬体标志分子LC3的表达量，降低自噬底物p62的表达量。进而用PCV2SD／2008株感染5w健康巴马香猪，感染后3、7、28d，在猪的淋巴结中的巨噬细胞和肝细胞胞浆内可见大量自

5、噬囊泡，在肺泡巨噬细胞以及淋巴结、脾脏、肾脏等组织细胞内可检测到自噬体标志物LC3分子表达。上述体外和体内实验结果表明，PCV2可以诱导宿主细胞自噬的发生。为了明确自噬对PCV2复制的影响，在PCV2感染PK-15细胞之前或之后分别应用白噬诱导剂雷帕霉素(rapamycin,Rapa)和自噬抑制剂3．甲基腺嘌呤(3-MA)人工改变宿主细胞的自噬活性，然后应用透射电镜、激光共聚焦免疫荧光、Real-timePCR及IPMA等技术检测细胞自噬囊泡、自噬标志分子或PCV2核酸含量，分析自噬对PCV2复制的影响。结果显示，利用Rapa诱导

6、细胞自噬可显著提高PK-15细胞内PCV2核酸含量(P

7、4只小鼠，取肝脏或脾脏检测自噬现象与PCV2载量。结果显示，感染后7、14d在自噬诱导小鼠的脾脏和肝脏混合物内没有检NNPCV2核酸，而于感染后21、28d显著高于自噬抑制组和PCV2单独感染组的含量(P<0．01)；自噬诱导小鼠肝脏、脾脏等组织中的病毒蛋白信号数量的变化趋势与自噬体标志分子LC3和Beclin信号数量的趋势基本一致。上述实验结果表明，细胞自噬参与了PCV2的感染过程，并对病毒在宿主细胞内的复制及持续感染产生影响。综上所述，本研究证明PCV2感染可诱导细胞白噬，而细胞自噬对PCV2的体外复制有促进作用，自噬有利于动

8、物机体对PCV2的清除，但同时自噬又影响病毒在动物体内的复制和持续感染。关键词：猪圆环病毒2型；细胞自噬；病毒复制；雷帕霉素；3．甲基腺嘌呤InteractionBetweenPorcineCircovirsType2andAutophagyAut