小儿肾母细胞瘤中p73和six2基因的表达及甲基化相关性研究

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1、AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterAssociationofExpressionandPromoterMethylationaboutP73andSIX2geneinChildrenwithNephroblastomaApprovedbyNationalNaturalScienceFoundationByDongjianSongSupervisor：Prof．JiaxiangWangPediatricSurgeryTheFirstAffiliatedHospitalofZhengzho

2、uUniversityMay2013原创性声明IIIIXIIlllllllllllllllllIIIIIIIIfIY2313207本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：、暮球走日期：加I’年y月工1日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校

3、保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅：本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：京寿JL日期：刀)年y月二1目摘要小儿肾母细胞瘤中P73和SIX2基因的表达及甲基化相关性研究研究生宋东建导师王家祥郑州大学第一附属医院,J,JLJ't,科河南郑州450052目的探讨,J,JL肾母细胞瘤组织及血液中P73和S

4、IX2基因的转录表达及其启动子甲基化状态，并观察其与临床病理学特征的关系，以期从表观遗传学角度探讨肾母细胞瘤的发生机制，为其未来基因靶向治疗提供理论依据。方法运用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和甲基化特异性PCR(MSP)法检测组织及血液中P73和SIX2基因转录表达水平及其启动子甲基化状态，并分析,bJL肾母细胞瘤中两者与临床病理特征的关系及基因的甲基化对其转录表达的影响。争士里皇口术1．组织及外周血中提取RNA的鉴定组织及外周血中提取RNA，电泳图显示28S条带亮度约为18S的两倍，说明RNA完整性较好；测定其A260／A280值大于1．90，说明RNA

5、纯度较高。2．组织及外周血中P73和SIX2基因mRNA相对表达量(RQ)RQ值均以一选定正常,J．．JLJ,t-周血为对照。瘤与瘤旁组织中P73、SIX2mRNA的相对表达量(RO)均大于正常肾组织(P<0．05)，而瘤和瘤旁组织之间无差异(P>0．05)；同时检测3例胎儿肾平均SIX2mI蝌ARQ值为330．55±18．97。病例组中P73、1摘要SIX2mRNA的相对表达量(RQ)均高于对照组(P<0．05)。3．组织及血液中中P73和SIX2基因启动子甲基化状态瘤与瘤旁组织中P73、SIX2基因甲基化阳性率均低于正常肾组织(P<0．05)，而瘤和瘤旁组织之

6、间无差异(P>0．05)；病例组中P73、SIX2基因甲基化阳性率显著低于对照组(P均<0．05)；3例胎儿。肾均为非甲基化。4．瘤组织及病例组中P73和SIX2mRNA相对表达量(RQ)、甲基化状态与临床资料的关系瘤组织中P73mRNA的RQ值在以肿瘤大小、临床分期、病理分型、有无淋巴转移分组之间比较，差异均有统计学意义(P<0．05)；瘤组织中SIX2mRNA的RQ值在以肿瘤大小、临床分期、病理分型、有无淋巴转移、有无血管浸润分组之间比较，差异均有统计学意义(P<0．05)；病例组中P73、SIX2mRNA的RQ值在以肿瘤大小、临床分期、病理分型、有无淋巴转移

7、、治疗转归分组之间比较，差异均有统计学意义(P<0．05)；瘤组织及病例组中不同临床资料分组之间P73、SIX2甲基化阳性率比较均无统计学意义(P>0．05)。5．组织及血液中P73、SIX2基因甲基化状态与其mRNA相对表达量(RQ)的关系甲基化组中瘤组织P73、SIX2的RQ值均高于正常肾组织(P<0．05)，非甲基化组中三者之间的RQ值比较无统计学差异(P<0．05)；甲基化组中瘤血P73、SIX2的RQ值均高于正常对照血(P<0．05)，非甲基化组中两者之问的RQ值比较无统计学差异(P>0．05)。6．组织及血液中P73、SIX2mRNA相对表达量(RQ)

8、与患儿生存