实时荧光定量pcr技术及其在昆虫学研究中的应用

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1、昆虫学报ActaEntomologicaSinica，December2008，51(12)：1293—1303实时荧光定量PCR技术及其在昆虫学研究中的应用王光华，赵伟春，程家安’(1．浙江大学昆虫科学研究所，杭州310029；2．浙江中医药大学生物工程学院，杭州310053)摘要：实时荧光定量PCR(real—timefluorescentquantitativepolymerasechainreaction，FQ—PCR)是一种利用荧光信号实时监测体外DNA分子PCR复制过程中每个循环的扩增产物，从而实现对DNA模板进行定量分析的技术，具有准确、快速、灵

2、敏、特异等优点，在动植物基因工程、动植物检疫、微生物鉴定与分类、食品安全检测和医学等领域中得到广泛应用。本文对实时荧光定量PCR技术的原理、优缺点及近年来新的荧光探针的原理、类型进行了评述，并对实时荧光定量PCR技术在昆虫学研究中的应用进行了综述。关键词：DNA；实时荧光定量PCR；荧光共振能量转移；探针；昆虫学中图分类号：Q966文献标识码：A文章编号：0454—6296(2008)12．1293．11Real-timefluorescentquantitativePCRtechniqueanditsapplicationsinentomologicalst

3、udiesWANGGuang—Hua，ZHAOWei—Chun，CHENGJia—An，(1．InstituteofInsectSciences，ZhejiangUniversity，Hangzhou310029，China；2．CollegeofBioengineering，ZhejiangChineseMedicalUniversity，Hangzhou310053，China)Abstract：Real—timefluorescentquantitativePCRisalaboratorytechniqueforquantitativemeasureme

4、ntoftheDNAtemplateconcentrationbymonitoringthefluorescentsignalineachofDNAamplificationcycle．Thistechniqueisaccurate，speedy，sensitiveandspecific．hhasbeenwidelyusedinsuchfieldsasbioengineering，quarantine，microbeidentificationandclassification，foodsafetyinspectionandmedicalscience．Int

5、hisarticle，theprinciples，characteristicsandrecentadvancesinfluorescentprobesofthereal-timefluorescentquantitativePCRassay，anditsapplicationsinentomologicalstudieswerereviewed．Keywords：DNA；real—timefluorescentquantitativePCR(FQ·PCR)；fluorescenceresonanceenergytransfer(FRET)；probe；ent

6、omology实时荧光定量PCR(real—timefluorescent变分析等方面的研究。本文对实时荧光定量PCRquantitativepolymerasechainreaction，FQ—PCR)是在技术的原理、优缺点及近年来新的荧光探针的原理PCR技术基础上发展起来的一种高度灵敏的核酸定和类型进行了评述，并对实时荧光定量PCR技术在量技术，Higuchi等(1992)提出了实时PCR的设想，昆虫基础生物学、分类、检疫、种群生态、抗药性和生1996年美国AppliedBiosystems公司首先推出了这一物防治等研究中的应用进行了综述。技术。该技术是在

7、PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号以实时监测整个PCR进程，最后通过1实时荧光定量PCR的基本原理标准曲线对未知模板浓度进行定量分析，实现了PCR从定性到定量的飞跃。由于该技术具有准确、实时荧光PCR均是基于荧光共振能量转移特异、灵敏和快速等特点，短短的几年就被广泛应用(fluorescenceresonanceenergytransfer，FRET)原理到生物学、医学、农业、食品、环保等多个领域，涉及(FOster，1948)，即当一个荧光基团与一个荧光淬灭到分(子检测、基因表达、核酸多态性分析和基因突基团的距离邻近至一定范围时，就会发生荧光能量基金

8、项目：国家自然科学基金项目(30771