金丝桃苷对bv2小胶质细胞的抗炎作用及其机制研究

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1、万方数据分类号：单位代码：10343学号：131009019湿l州翳科大警WENZHoUMEDlCALUNIV曰≈SlTY硕士学位论文论文题目：全丝拯董盟曼娑尘膣厦细胞的揎煎佳用区芸扭剑班塞研究生姓名：王亚楠学科专业：生物学类型：学术型指导教师：祝建洪教授二。一六年五月万方数据论文题目：全丝挞董挝鲤坌尘膣厦细胞的揎煎佳眉厘甚扭趔研塞答辩委员会成员：鲎丞萱盟塞旦一黄隆王煎握昌筮巫宜旦论文答辩日期：2016年05月31日万方数据目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯2ABSTRA

2、CT⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．4前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．6一、实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7(一)实验动物⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．7(二)实验所用细胞株⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一7(三)主要实验试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．7(四)主要实验耗材⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．8(五)实验仪器⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯9(六)主要溶液配制⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．10二、实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．12(一)BV2细胞和SH—SY5Y细胞复苏、培养和冻存⋯⋯⋯⋯．12(二)原代小胶质细胞的培养⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯12(三)MTT检测细胞活性⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯14(四)ELISA检测细胞因子⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯15(五)Griess原理检测NO含量⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．15(六)RNA分离提纯及RT．PCR⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．1

4、6(七)蛋白免疫印迹⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯18(八)小胶质细胞条件培养液实验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯20三、数据分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯20结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯21一、金丝桃苷对BV2细胞活性的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一21二、金丝桃苷减少由LPS刺激的BV2细胞激活产生的促炎因子21三、金丝桃苷减少LPS刺激的BV2细胞产生的NO⋯⋯⋯⋯⋯．．23四、金丝桃苷抑制LPS刺激的BV2细胞p38和p65／NF．1出信号通路的

5、激活⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．24五、金丝桃苷通过p38和p65／NF．1出信号通路抑制LPS诱导的小胶质细胞激活⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．25六、金丝桃苷降低小胶质细胞引起的神经毒性⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯28七、金丝桃苷抑制LPS刺激的原代小胶质细胞激活产生的炎症因子和No⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．29分析与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．32，J、结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

6、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．34万方数据参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．35附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．39致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．40综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．4l独创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．50万方数据温州医科大学硕士学位论文注：按字母顺序排列万方数据温州医科大学

7、硕士学位论文金丝桃苷对BV2小胶质细胞的抗炎作用及其机制研究中文摘要目的：本研究主要为探究金丝桃苷对脂多糖(1ipopolysaccharide，LPS)刺激BV2小胶质细胞激活及炎症因子释放的影响，并探讨其潜在作用机制。方法：根据实验要求将BV2细胞及原代小胶质细胞接种在细胞培养板内，培养24h后更换成无血清培养基，饥饿处理过夜。根据实验需要，用不同浓度的金丝桃苷预处理30min，然后用100ng／ml的LPS刺激不同时间，用ELISA、Griess法、蛋白免疫印迹检测细胞培养液中NO、IL．1D

8、以及TNF．俚的释放量，用RT-PCR技术检测IL．1B、TNF．a的mRNA表达水平；用蛋白免疫印迹检测ERK、JNK、P38及p65／NF一1(B信号通路的变化。结果：1．金丝桃苷减少由LPS刺激BV2细胞激活产生的炎症因子LPS刺激BV2细胞24h后，细胞培养液中的IL-113和TNF．n含量明显增多，而金丝桃苷本身对这些炎症因子无明显作用。经金丝桃苷预处理后的细胞，LPS刺激小胶质细胞激活产生的IL．113和TNF．Ⅱ呈现剂量依赖性的减少：而且，金丝桃苷能够一