“肺合皮毛，开窍于鼻”实质研究

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1、引言“肺合皮毛，开窍于鼻”是《素问·咳论》中“皮毛者，肺之合也”与《素问·阴阳应象大论》中“肺生皮毛”、“肺主鼻……，在窍为鼻”等论述的简称，它高度概括了肺脏与皮毛、鼻形体官窍之间的多种关系。肺与皮毛、鼻在生理，病理上息息相关，肺输送精津于皮毛，上注清窍，使皮毛、鼻窍得以濡养；肺气失常，则皮毛失养，鼻窍不利。“肺合皮毛，开窍于鼻”是祖国医学的精髓理论之一，几千年来在祖国医疗实践活动中发挥着重要的指导作用。近年来，许多学者就“肺主皮毛”及“肺主鼻”理论从文献，实验和临床研究等方面进行了探讨和研究。但有关“肺合皮毛，开窍于鼻”理

2、论的实质与内涵的相关研究较少。我们在以往的实验中发现，大鼠在肺系病造模过程中出现皮毛枯黄打缕脱落，鼻腔粘膜潮红，分泌物增多等情况，因此我们采用熏烟并气管内滴加脂多糖及施加风寒因素的方法建立肺气虚与风寒乘虚犯肺两种肺系病证动物模型，并观察在造模过程中大鼠皮肤、毛发，鼻腔分泌物等变化及一般情况变化，对大鼠鼻腔粘膜、皮肤、毛发等进行采样收集，通过对其相关指标的测定及观察，揭示“肺合皮毛，开窍于鼻”理论的实质与内涵。本实验首次从组织形态，细胞因子，基因表达及免疫学等多层次多角度对“肺合皮毛，开窍于鼻”这一经典中医学理论进行深入的研究

3、，揭示“肺合皮毛，开窍于鼻”理论的实质与内涵，深化对其的理解与认识，为该理论指导临床实践，拓展该理论的应用范围及现代发展应用提供新的思路和理论依据。1实验研究一、实验材料（一）实验动物SPF级健康Wistar大鼠30只，雌雄各半，体质量（200±20）g，购于山东中医药大学实验动物中心，动物生产许可证号SCXK（鲁）20050015。（二）实验试剂指定品牌香烟；脂多糖(lipopolysaccharicle，LPS产于美国Sigma公司)；戊巴比妥钠（国药集团化学试剂有限公司Lot．No．ws20060401）；8%硫化钠（

4、购于启光科贸生物公司）；TGF-β1抗体（Lot.No.MAB1032），P物质抗体（Lot.No.MAB1032），IL-4，INF-γELISER试剂盒（Lot.No.EL270611，EA240713），购于深圳晶美生物公司；内参照β－actin引物序列：forward：5’-GAGGGAAATCGTGCGTGAC-3’，Reverse：5’-GGACTCATCGTACTCCTGCTTG-3’product481bp；EGF引物序列：Rat-EGF-forward：5'AGAAGCGGGACTACCACG3'Rat-E

5、GF-reverse:5'GGATGGAGCCACCGTTAT3'product619bp（三）实验仪器AE200电子分析天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司）；酶标仪（型号：Biocell2010）；离心机（北京时代北利离心机有限公司DT5-3）；消解仪(MDS—2003F型系列密闭微波纸样系统)；原子吸收光谱分析仪(美国Solaar公司生产：M系列650510v1.26)；日立H-800型透射电子显微镜（日本）；全封闭脱水机（LEICAASP300）；全自动包埋机（LEICAEC1160）；自动切片机（LEICARM21

6、35）；生物组织摊片机（湖北省医用电子仪器厂CS-Ⅲ）；显微镜（日本OLYMPUSCX41）；PCR仪（PE公司产品，PTC-200PeltierThermalCycler）；BioRad电泳仪及电泳槽，eppendorfmicrospectrophotometer等。2二、实验方法（一）动物分组实验前将动物处于无风、20±2℃、相对湿度50％～55％的环境中适应性饲养1周，自由饮水饮食。随机数字表法分为3组：正常对照组、肺气虚模型组、风寒乘虚犯肺模型组。（二）动物模型建立参照我们以往实验所使用的慢性阻塞性肺疾病（COPD）

7、造模方法[1]并加以改良，采用熏烟并气管内滴加脂多糖及施加风寒因素的方法建立肺气虚与风寒乘虚犯肺动物模型：①在室温环境中，第1、14天大鼠麻醉后气管内滴加脂多糖：将造模组大鼠逐一称重，按50mg/kg体重腹腔注射浓度为0.4%戊巴比妥钠溶液，待大鼠麻醉后，将其固定于解剖台上，头低位暴露声门，将18号静脉套管针针头退至套管内约2mm处（防止刺破大鼠气管）沿气管走行快速插入气管，接1ml注射器，1s内注入溶于注射用生理盐水的浓度为1mg/ml的脂多糖0.2ml(200μg)，将大鼠直立，左右旋转，使脂多糖在肺内均匀分布。第2～2

8、1天给予大鼠每天两次香烟烟熏，（滴脂多糖当天不熏烟）。每次点燃烟丝的量为9.898g（0.707g×14支），持续时间大约1小时，间隔4小时。被动吸烟方法：将大鼠放入自制的有机玻璃染毒箱（规格：100cm×80cm×50cm）内，香烟点燃后，用60ml注射器吸满烟雾，然后通过三通管将香烟烟