广州市哨点医院腹泻病人隐孢子虫和蓝氏贾第鞭毛虫感染的分子流行病学研究

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1、南方医科大学2011级硕士学位论文广州市哨点医院腹泻病人隐孢子虫和蓝氏贾第鞭毛虫感染的分子流行病学研究Molecular印idemiologicalstudiesofC巧ptosporidiumandGiardialambliadiamleaofGuangzhousentinelhoSpital学位申请人导师姓名专业名称培养类型培养层次所在学院答辩委员会主席答辩委员会委员课题来源：自选课题姚月娴俞守义教授陈清教授流行病与卫生统计学学术型硕士研究生公共卫生与热带医学学院陈维清教授柯昌文教授曾年华研究员陈青山教授胡贵方副教授20

2、14年5月20日广州硕士学位论文广州市哨点医院腹泻病人隐孢子虫和蓝氏贾第鞭毛虫感染的分子流行病学研究硕士研究生：姚月娴指导教师：俞守义教授陈清教授摘要研究背景：人体肠道感染性腹泻大多是由细菌、病毒引起，但近年来由肠道寄生性原虫引起的腹泻逐渐增多。肠道寄生原虫属于原生动物亚界，广泛分布于自然界的各种生态环境中，不少原虫既可感染人类，又可寄生于某些动物，大多以水作为主要传播载体，是引起腹泻的主要病原体之一。隐孢子虫(c呵ptosporidium)和蓝氏贾第鞭毛虫(Giardialamblia，简称贾第虫)作为可感染包括人在内的大

3、多数动物胃肠道的寄生性原虫，可引起宿主轻重不一的感染，具有明显的发病率和病死率。免疫功能正常的个体，感染了隐孢子虫和贾第虫(以下合称为两虫)可导致急性、自身限制性腹泻：但对于免疫力较弱者，尤其婴幼儿、免疫功能缺陷者则可引起严重腹泻，甚至死亡。隐孢子虫病(Cryptosporidiosis)和贾第虫病(Giardiasis)的发生和传播主要通过粪一口传播，多种途径感染，包括人一人接触，动物一人接触，摄入被卵(包)囊污染的水、食物，与污染的环境物接触等。病原体特征有待深入研究目前国外对隐孢子虫和贾第虫的病原学特征、流行病学、基因

4、组学等己进行了大量的研究，但国内对其流行病调查研究仍仅停留在简单粗糙的检出水平上，尚未见隐孢子虫病和贾第虫病分子流行病学和基因分型的系统报道，相关研究工作还有待进一步加强。I摘要病原体检测方法有新进展检测隐孢子虫和贾第虫的方法很多，包括病原学检测、免疫学检测和分子生物学检测等。应用显微镜对粪便标本进行病原学检测多年来被认为是检测隐孢子虫和贾第虫的“黄金方法”，然而该方法极易漏检，仅适用于有腹泻症状且排出卵+(包)囊量较大的患者，并且特异性低、费时、费力；而免疫学检测由于操作复杂且不能用于早期诊断，其应用也受到了一定限制。目前

5、，分子生物学方法已广泛应用于隐孢子虫和贾第虫的检测，该方法相对其他传统方法除了具有高灵敏性、特异性强的优点外，还可以进行虫种、基因型及亚基因型的区分，并且能同时检测大量样本。研究表明巢式聚合酶链反应(NestedPcR)检测隐孢子虫和贾第虫的敏感性可以达到1个卵(包)囊，无论是检测环境样本还是临床样本，此方法相对于传统的方法在敏感性特异性上均有了较大的提高。既往虽然对隐孢子虫和贾第虫病例报道少，但实际病人或感染者众多，只是无症状的或症状轻的居多，其危害尚未引起足够的重视。再者以往传统实验室镜检方法检出率较低，报道的感染率并不

6、能反映其实际感染情况，因此，基于灵敏性高特异性强的检出方法，连续长期地对隐孢子虫和贾第虫的感染情况进行监测，能为进一步研究提供丰富可靠的资料。流动人口两病的防控有待加强广州地区旅游业发达，人口密集且流动性大，城区和城乡结合部人员构成复杂，经济条件、知识水平、行为卫生习惯等参差不齐，而感染性疾病中的腹泻发病率一直居高不下。本研究分别采用病原学检测方法和NestedPcR法对广州市哨点医院2012年6月～2013年5月期间就诊的腹泻病人进行隐孢子虫病和贾第虫病的分子流行病学调查，希望能了解隐孢子虫和贾第虫在广州地区的感染和流行现

7、况，估计广州地区是否存在暴发流行的潜在隐患，研究其分子流行病学和基因型分型特征，为我国隐孢子虫和贾第虫的流行病学调查提供全面系统的背景资料。II硕士学位论文研究目的：1．了解2012年6月～2013年5月广州市哨点医院门诊腹泻病人隐孢子虫和贾第虫感染状况及流行病学特征，完善我国原虫性腹泻的流行病学基础资料；2．了解该地区腹泻病人隐孢子虫和贾第虫的基因型及亚基因型别，探讨其流行优势株，明确分子特征及基因型分布情况；3．为广州地区儿童和成人原虫感染性腹泻的研究提供丰富的背景资料。研究方法：1．标本收集：收集2012年6月至201

8、3年5月期间在广州市某三甲医院及城中村社区医院门诊就诊的348例年龄14岁及以下腹泻儿童和110例年龄18岁及以上的成人腹泻患者的粪便标本、人口学资料及流行病学资料。2．标本处理方法：每份粪便标本取5～log或5～lomI，加入2．5％重铬酸钾溶液，震荡后制成10％的悬液，分装三管后4℃保