布鲁氏菌主要外膜蛋白对树突状细胞成熟度及抗原递呈的影响.pdf

《布鲁氏菌主要外膜蛋白对树突状细胞成熟度及抗原递呈的影响.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、分类号：密级：公开学号：2015201709单位代码：10759石河子大学硕士学位论文布鲁氏菌主要外膜蛋白对树突状细胞成熟度及抗原递呈的影响学位申请人童志霞指导教师陈创夫教授申请学位门类级别农学硕士学科、专业名称预防兽医学研究方向畜禽病原分子生物学所在学院动物科技学院中国·新疆·石河子2018年6月EffectsofMajorOuterMembraneProteinsofBrucellaontheMaturityandAntigenPresentationofDendriticcellsADissertationSubmittedtoShiheziUniversityInPartialF

2、ulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofAgricultureByTongZhixia(Preventiveveterinaryscience)DissertationSupervisor:Prof.ChenChuangfuJune,2018课题来源国际科技合作项目项目名称：新型布鲁氏菌病鉴别诊断技术的联合研发项目编号：2015DFR31110I中文摘要目的：布鲁氏菌病是目前全世界范围内最常见的人畜共患病之一，严重危害我国畜牧业生产的发展。树突状细胞（DCs）是目前研究认为最有效的专职抗原递呈细胞（APC），在病原菌和宿主免疫的相

3、互作用中发挥重要作用。本研究旨在探讨布鲁氏菌主要外膜蛋白如何调节DCs的成熟度，影响抗原递呈效率以及活化初始T淋巴细胞的能力，进而影响宿主针对布鲁氏菌的先天性免疫和获得性免疫，为合理设计针对布鲁氏菌的疫苗以及更好地理解布鲁氏菌致病机制和宿主的保护性免疫应答机制奠定理论基础。方法：（1）布鲁氏菌主要外膜蛋白刺激小鼠BMDCs，采用流式细胞术分析小鼠BMDCs细胞表面共刺激分子及MHC分子的表达情况，运用ELISA方法检测细胞因子的分泌情况；运用qRT-PCR技术检测TLRsmRNA的转录水平，同种淋巴细胞混合反应（MLRs）测定外膜蛋白刺激对小鼠BMDCs激活同种异体小鼠脾脏T细胞增殖的能

4、力。（2）通过布鲁氏菌外膜蛋白基因缺失株和疫苗株RB51，亲本株2308分别侵染小鼠BMDCs，运用流式细胞仪检测小鼠树突状细胞表面分子和MHC分子的表达情况，ELISA技术检测相关细胞因子的分泌情况，qRT-PCR技术检测布鲁氏菌侵染的BMDCs中TLRsmRNA的转录水平，同种淋巴细胞混合反应（MLRs）测定布鲁氏菌侵染对小鼠BMDCs激活同种异体小鼠脾脏T细胞增殖的能力。（3）通过用布鲁氏菌主要外膜蛋白缺失株及布鲁氏菌亲本株2308、布鲁氏菌疫苗株RB51分别侵染小鼠BMDCs，CFU计数检测胞内生存和复制情况，经过流式细胞仪检测布鲁氏菌外膜蛋白对小鼠BMDCs凋亡的影响。结果：（

5、1）流式细胞术检测结果显示，外膜蛋白（OMP10、OMP19和BP26）刺激后BMDCs表面共刺激分子和MHC分子的表达均显著增加，而OMP25和OMP31刺激BMDCs后显著降低了部分表面分子的表达；ELISA结果显示，外膜蛋白（OMP10、OMP19和BP26）刺激组BMDCs培养上清液中IL-12，IL-6、INF-γ、TNF-α的分泌显著增加，IL-10和IL-4的分泌显著减少，OMP25和OMP31刺激后的结果与之相反。同时，qRT-PCR结果确定，TLRs在各组处理的BMDCs中均有不同程度的表达；MLRs测定结果显示，外膜蛋白（OMP10、OMP19和BP26）刺激BMDC

6、s后促进了同种异体小鼠脾脏T细胞的增殖，而OMP25、OMP31刺激抑制了T细胞的增殖。（2）流式细胞仪检测发现，经外膜蛋白缺失株和疫苗株RB51侵染后BMDCs细胞表面分子表达显著升高，亲本株2308侵染后BMDCs细胞表面分子的表达显著降低；ELISA结果表明，缺失株和疫苗株RB51侵染小鼠BMDCs，相较于对照组IL-12，IL-6、INF-γ、TNF-α的分泌显著增加，IL-10和IL-4的分泌显著减少，亲本株2308侵染后BMDCs细胞因子IL-12，IL-6、INF-γ、TNF-α的分泌量显著减少，IL-10和IL-4的分泌量显著增加；qRT-PCR结果显示，在各组处理的BM

7、DCs中TLRs均有不同程度的变化；MLRs测定I结果显示，外膜蛋白缺失株和疫苗株RB51侵染BMDCs后显著增加了同种异体小鼠脾脏T细胞的增殖效率，而亲本株2308侵染的BMDCs抑制了T淋巴细胞的增殖。（3）CFU结果显示，缺失株组侵染的BMDCs中CFU数量在各时间点呈下降趋势，疫苗株RB51组在侵染后6hCFU数量显著上升，随后呈下降趋势，在侵染后48h，有微弱的回升。亲本株2308侵染的BMDCs在侵染后6hCFU数量显著