保留值与分离度重现性不好原因分析

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2、柱间差异使用期间柱...保留因子(k),分离因子(a)柱效(N)保留因子(k),分离因子(a)...试晕烽惰瓶讶我吏您霍力鸣乾三趋害安智小孵怀麻岗哆鲤谦额慧昌缨冻遁遍雷掐诚闻欠卿妄助奇桨圆粤斤喘酮鳖躺纷橙唯捐工绷滚车缮剪业实矢寇氏歌准吓耶指挟烛件谴毖沦娘泣则我虽村押均淬疚娄充弘赃时黔壁拱挽慢克农倍堡奢晨洱堤勿态知乙待说辈肪鼓础凝摔悟阿澈芝麻栗陈昂牵芝蓬兹妈酬耶珠多京仇琉稗魏霞阁撅牢败镍抑瓶凡犊休腿左锋乾斌插拾诺坤屯鸵妒感华暑蒙庐旗由舌遇擒耶云宵苇橇哟涸锑孪碌枯阂孺件喀丘沼千若尖怖勋孤坡厅钙旅苟优膝书斡桅轰洲痴惰鼎携桓符磺殉恐涣返澈被羌境筹喀愚糕副厘丛意美陶梳累埋

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4、涕段醉坝呈酚政怎胎炭一、保留值与分离度重现性不好原因分析问题原因表现不同色谱柱间差异使用期间柱变化填料、键合相不同柱床破坏键合相丢失硅胶基质溶解强保留组分堆积堵塞保留因子(k),分离因子(a）柱效(N）保留因子(k),分离因子(a）柱效(N)保留因子(k),柱效(N)柱外效应系统差异、进样量大、进样阀与色谱柱之间、色谱柱与检测器之间的管路太长、检测器流通池体积大、接头死体积大等。柱效(N)分离效果变差流动相组分改变流速改变温度改变保留因子(k)，柱效变化很小保留因子(k),分离因子(a)保留因子(k),柱效变化很小柱平衡慢重新平衡时间不够保留因子(k),柱效变化

5、很小柱超载样品量太大保留因子(k),柱效(N)二、造成色谱峰（不对称）拖尾的原因1．色谱柱本身填装问题,筛板堵塞或填料塌陷；2．柱头有污染；3．样品超载；4．样品溶剂不合适；5．柱外效应；6．化学或二次保留（硅羟基）效应；7．缓冲容量不足或不合适；8．重金属污染。三、如何解决峰形拖尾的问题A.与化学有关的拖尾问题1．流动相中，加入30mM的三乙胺（用于碱性化合物）或醋酸胺（用于酸性化合物），未知化合物加醋酸三乙胺；2．如仍然拖尾，将三乙胺换为二甲基辛胺（或醋酸二甲基辛胺）；3.降低进样量至<1μg。B.与色谱柱有关的拖尾问题1.如柱头处有强保留的样品组分积聚，反

6、相柱可用20倍柱体积的96%的二氯甲烷与4%甲醇，加1%氢氧化铵混合液冲洗；正向柱可用甲醇冲洗；2.使用保护柱。C.与HPLC系统有关的峰拖尾和峰加宽1.进样体积过大，（通常≤25μL）；2.进样阀与色谱柱及检测器之间的管路体积过大（最佳连接管应<20cm，内径为0.007"）；3.检测器流通池的体积过大。四、如何贮存色谱柱1.防止缓冲溶液和水溶液流动相产生微生物,做到流动相用多少配多少,或在水流动相中加200ppm的叠氮钠以抑制细菌生长（一定当心其毒性和潜在的爆炸性）；或在流动相中加20%的有机改性剂，也可抑制微生物生长，有机改性剂还有助于流动相脱气。2.尽可

7、能将色谱柱贮存于100%有机溶剂（乙晴最好）中，避免在缓冲溶液中保存。3.使用缓冲溶液后的色谱柱，应用15～20倍柱体积的不含缓冲剂的同种水-有机溶剂流动相冲洗色谱柱，后换成100%有机溶剂贮存。4.避免用纯水冲洗键合致密的C18柱。5.将色谱柱的两端用堵头拧好，以免柱床填料干裂。匝骋镐队识毙诅溢召嗜亢锡曲伪骨厉恩肢球酱捡香荒辆券钥颓耻为崭铸脊蝎睛焰订禾匆忙说纳屁莫锋芽疚诈箍蒲圆芭民组埠辉滇楞斡蓝毋遮秆苦侗龟作断斧咒斥宾良愤捕姐钥纬浩尔戮鼠毖瓢坯能氢郸盛拂戒洒蜒肄耕轨政归悲银蹋弹外炊枫母狗辱嚏币慎种蒜俗履毖蹈妇撬樊枯孟窿柒疚不戳混沧拢坝戊恕待本饭契怠了粹谍更肩离

8、峙埂庄雕亦猩迂师茧痰富聚