vegf、eg-vegf、tgf-β1在多囊卵巢中的表达及意义

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1、中图分类号：R711.75硕士学位论文VEGF、EG-VEGF、TGF-β1在多囊卵巢中的表达及意义院（系）、所临床医学院研究生姓名陈丽娟学科、专业外科学（妇产科）导师姓名钟雪梅教授二Ο一三年四月1目录1VEGF、EG-VEGF、TGF-β1在多囊卵巢中的表达及意义…11.1中文摘要………………………………………………………11.2英文摘要………………………………………………………41.3前言……………………………………………………………81.4材料与方法……………………………………………………121.5结果……………………………………………………………161.6讨论…

2、…………………………………………………………281.7结论……………………………………………………………361.8参考文献………………………………………………………371.9英汉缩略词对照表……………………………………………402致谢……………………………………………………………413多囊卵巢综合征与血管生成因子研究进展（综述）………422VEGF、EG-VEGF、TGF-β1在多囊卵巢中的表达及意义摘要目的:多囊卵巢综合征(PolycysticOvarianSyndrome，PCOS)是常见于育龄妇女的生殖内分泌疾病，以稀发排卵或无排卵、高雄激素血症和多囊卵巢为主要特

3、征，临床表现多样。PCOS与胰岛素抵抗、糖尿病以及肥胖关系密切，其发病机制仍未完全明确。大量未成熟卵泡形成排卵障碍性不孕是本病的重要原因，已有研究发现此与颗粒细胞的功能障碍有关。前期我们检测Survivin、XIAP及Caspase-3在多囊卵巢颗粒细胞的表达情况及其相关性，探讨凋亡抑制蛋白基因及Caspase-3在多囊卵巢发生、发展中的作用，为多囊卵巢的治疗提供了一定实验依据。由于PCOS病因的复杂性，可能存在的病因较多，故本次希望从血管生长因子角度来研究探讨该疾病的发病机制。PCOS的突出病理学特点之—，是卵巢间质及卵泡囊的血管高度增生，导致排卵异常。血管生成因子的

4、调节紊乱可引起血管增生异常，同时位于卵巢内的血管生成因子，在卵巢局部通过自分泌与旁分泌，以及细胞内调节途径对卵巢颗粒细胞和卵泡膜细胞等调控，对卵泡的正常发育具有重要作用。卵巢内调节因子的异常可能是导致多囊卵巢的不排卵原因。VEGF、EG-VEGF、TGF-β1作为血管生成因子，同时也作为卵巢内局部调节因子与PCOS的发病有关，本研究通过检测VEGF、EG-VEGF、TGF-β1在多囊卵巢中的表达,进一步探讨PCOS的发生机制。方法：1.选择符合实验组和对照组纳入标准和排除标准的卵巢石蜡包埋组织。实验组26例，年龄在14-39岁之间，平均28.8±6.653岁；对照组12

5、例，年龄17-39岁之间，平均29.5±5.72岁。上述患者术前均无激素服用史、阴道流血史。2.卵巢石蜡包埋组织用常温切片机连续切片，经摊片后贴附于载玻片上，60℃恒温持续烘烤24小时，采用免疫组化Envision法检测VEGF、EG-VEGF、TGF-β1在各组卵巢卵泡颗粒细胞、卵泡膜细胞和卵巢间质中的表达水平。3.镜下观察:采用日本OLYMPUS公司的Ax-70显微成像系统进行观察分析，每张切片随机取8个(×200)高倍视野。阳性细胞的条件：①细胞结构清晰，有完整的细胞膜、细胞质及细胞核结构组成；②阳性颗粒定位、定性好；③细胞着色较背景染色颜色明显。VEGF阳性表达

6、判断以血管内皮细胞中胞质出现棕黄色或黄色颗粒，无棕黄色或黄色则为阴性。EG-VEGF阳性表达判断以血管内皮细胞中胞浆出现棕黄色或黄色颗粒，无棕黄色或黄色则为阴性。TGF-β1阳性表达判断以细胞胞质中出现黄棕、黄色或黄色颗粒，无棕黄色或黄色则为阴性。4.图像采集：由电脑进行采集图像，采用10×10倍镜下观察阳性表达的各级卵泡及间质，并查找囊状卵泡；采用10×10倍以及×200倍镜下定位观察囊状卵泡细胞各层，沿细胞层取连续8个视野进行拍照。5.图像分析：采用IPP（ImageProplus）6.0图像分析软件，对囊状卵泡颗粒细胞、卵泡膜细胞和卵巢间质进行免疫组化着色后的定量

7、分析及计算光密度（OD）值，其免疫组化着色的平均光密度（AverageOpticalDensity；AOD）是该切片的分光密度值。并比较各组间的差异以及两组之间的差异所得数据均数±标准差（x±s）表示，采用spss13.0统计软件进行统计学分析，各组间比较采用t检验，P＜40.05为有显著性差异。结果：实验组与对照组年龄比较，P﹥0.05,差异无统计学意义。PCO组VEGF在卵巢颗粒细胞内高表达，EG-VEGF在卵巢内膜层及基质中高表达，TGF-β1在窦状卵泡细胞膜细胞和卵巢间质的表达呈高表达。PCO组VEGF表达显著高于正常组，P﹤0.