鱼糜制品中大豆蛋白的检测

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1、篓萎大学硕士学位论文鱼糜制品中大豆蛋白的检测Detectionofsoybeanproteinsinsurimiproducts学术诚信声明JlUlIlllI』1IlllllIWIIIIIIIIIW14Y2631573兹呈交的学位论文，是本人在导师指导下独立进行的研究工作及取得的研究成果。除文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。本人依法享有和承担由此论文产生的权利和责任。声明入(签名)：订苯纠i时间：，of妒。6．1笤保护知识产权声明本人完全了解集美大学有关保留、使用学位论文的规定

2、，即：学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意集美大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。作者(签名)：沮专强咖导师(签名)：时间：)口l垆．鱼糜制品中大豆蛋白的检测摘要近年来，随着鱼糜制品产量的不断增加，鱼糜原料价格的不断上涨，向鱼糜制品甚至原料鱼浆中添加价格较低的大豆蛋白代替鱼肉蛋白的现象经常出现，严重损害了消费者的权益。本研究以大豆蛋白中热稳定性良好的大豆胰蛋白酶抑制剂(Soybeantrypsininhibitor，ST

3、I)及p．伴大豆球蛋白的p亚基为目标蛋白，制备抗体并建立高效灵敏的大豆蛋白检测方法，为鱼糜制品中大豆蛋白检测试剂盒的研发提供技术支持。大豆粉通过丙酮浸泡、酸处理、硫酸铵盐析、DEAE—Sephacel及SP．Sepharose离子交换层析柱的纯化，最终获得高纯度的STI。将STI经110℃处理30min后作为抗原，免疫新西兰雄兔(从小喂养不含大豆蛋白的饲料)，制备抗STI多克隆抗体。通过免疫喂养不含大豆蛋白饲料的BALB／c小鼠制备了1种单克隆抗体(A11．6)。并分别采用ProteinASepharose及ProteinGSe

4、plaarose柱层析法对抗体进行纯化。分别将制备的多克隆抗体及单克隆抗体进行大豆蛋白免疫检测方法的构建。以抗STI多克隆抗体建立的c．ELISA法，最低检测限为24nagSPI／kg食物，对含5、10、20mg／g大豆分离蛋白的鱼浆进行回收率分析，回收率为76．O％～109．O％。利用抗STI单克隆抗体(A11．6)建立的传统的Westernblot法及免疫荧光法最低检测限分别为50mgSPI／kg食物、187．5mgSPI／kg食物。两种方法均能对鱼糜制品中大豆进行半定量分析，但传统的Westernblot法的灵敏度比免疫荧

5、光法高，而免疫荧光法具有耗时短、安全等特点。对传统的Westernblot法的检测准确度进行分析，回收率为81．9％一一98．7％。同时，以A11-6为包被抗体、抗STI多克隆抗体为检测抗体，建立s—ELISA法，最低检测限为13．6mgSPI／kg食物，定量限(LOQ)为61．7mgSPI／kg食物。通过对鱼丸及鱼浆中的大豆蛋白进行检测，回收率为100．1％122．2％，说明建立的s．ELISA法准确性高。本研究根据建立的s．ELISA法成功开发了鱼糜制品中大豆蛋白定量检测试剂盒。另一方面，通过等电点沉淀和Q．Sepharos

6、e阴离子交换层析柱的纯化，从大豆中得到高度纯化的48kDa的蛋白质。经质谱分析得到9个肽段，共175个氨基酸，与大豆中的B．伴大豆球蛋白的B亚基同源性为100％，说明纯化的蛋白为B．伴大豆球蛋白的B亚基。以该目标蛋白分别制备多克隆抗体及单克隆抗体，所得到的多克隆抗体特异性良好，但由于效价较低无法建立c．ELISA法。且经初步筛选得到的抗8亚基亚克隆特异性差，因此不再继续制各单克隆抗体。但是本研究可以为以p．伴大豆球蛋白的p亚基为目标蛋白构建检测鱼糜制品中大豆蛋白的方法提供一定的理论参考。关键词大豆蛋白，鱼糜制品，抗体，蛋白质印迹

7、，酶联免疫吸附测定，检测Detectionofsoybeanproteinsinsu—miproductsAbstractInrecentyears，谢mtheproductionofsurimiproductsincreasing，thelow—valueproteinsespeciallysoybeanproteinsarefrequentlyaddedtosurimiproteinsorrawmaterials，whichinjurioustotheinterestsofconsumers．Theaimofthisstud

8、yWastoestablishsensitiveandreliablemethodsfordeterminationofsoybeanproteinsinsurimiproducts．Soybeantrypsininhibitor(STI)andBsubunit