几种纽形动物的核型及核dna含量研究

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1、几种纽形动物的核型及核DNA含量研究染色体臂数m)的计算，一般根据Mattey的建议，m，sln染色体计两条臂，st,t染色体计一条臂。“地球的历史记载于地壳中，而生物的历史却记载在染色体上”(吴政安，1985)。染色体核型分析是细胞遗传学研究的基础。核型分析对于研究种内或种间的核型变化，染色体的数量或结构的变异，生物的起源和进化，以及鉴定染色体疾病等具有重要的作用。从现存物种的染色体组型研究和比较中来探讨种群的进化路线和亲缘关系，不仅对于分类学和系统发生研究有着十分重要的意义，而且对于现代分子生物

2、学中的基因定位、原位杂交、杂交育种和多倍体育种等方面也有重要意义。当然，作为基础的染色体组型研究，在实践中对解决科研问题往往难以深入细致的揭示问题的本质。以它为基础发展起来的一些染色体研究技术则从不同的途径，力图从更深的层面揭示生物科学的本质。1．2染色体带型分析带型研究是对染色体形态结构比较精细分析的研究，是一项借助于某些特殊的染色程序使染色体在一定部位内出现深浅不一带纹的细胞学方法。染色体显带技术其实质是DNA、蛋白质和染料之间相互作用的结果。目前常用的显带技术有Q带、G带、C带、R带：银染带、

3、高分辨带等。染色体显带技术的建立是细胞遗传学研究中的一项重大突破。1969年瑞典科学家Caspersson用荧光染料氮芥喹吖因(quinacrinemustard)技术处理染色体，使染色体显示出特殊的荧_光带型(Q带)，实验证明亮区相当于DNA分子中A／T含量相对丰富的区段，暗带则G／C含量相对丰富。从70年代初起，染色体的研究又盛极一时，许多学者从事染色体显带技术的研究，建立了各种显带方法，常用的染色体显带技术有：C带技术(采用着丝粒英文单词centromere的第一个字母表示)，通常是通过碱性处

4、理，盐溶液孵育，Giemsa染色得到的，通常位于染色体的着丝粒区域：G带技术(采用吉姆萨染料英文单词Giemsa的第一个字母表示)，通常是使用温热的盐溶液或者温和的胰酶消化后，Giemsa染色得到。R带技术(采用相反英文单词reverse的第一个字母表示)，R带是G，Q带的反带，是先使用高温条件下的磷酸盐缓冲液孵育，Giemsa染色得到。1975年以来，Yunis几种纽形动物的核型及核DNA含量研究等建立了高分辨显带法(Yunis，1978)。首先获得大量的晚前期或早中期分裂相，使染色体上的区带数大

5、大增加，然后用放线菌素D处理，阻碍染色体的凝缩，使染色体更为细长，因而显示出更多的条带。银染带(Ag-NORs)(采用核仁组织区英文nucleolarorganizers的第一个字母表示或再加上第二个单词的前两个字母)的显示是由于核仁组织区中与18sRNA和28sRNA转录有关的酸性蛋白质，经硝酸银染色后，选择性的还原了银，使染色体上有活性的核仁组织区呈现黑色。此外还有Cd带技术(采用centromeriedots的第一个字母表示)，BG带技术(采用5．溴脱氧尿嘧啶核苷处理细胞和吉姆萨染色英文单词5

6、-bromodeoxyurine和Giemsa的第一个字母表示)，G11带技术(采用吉姆萨英文单词第一个字母在pH11条件下染色)及核酸酶显带技术，DNA杂交显带技术，抗体显带技术等。有了显带技术，不仅能更准确地进行同源染色体的配对和核型排列，而且能精确的辨认染色体的结构变化，并能正确的识别特定的染色体以及追溯标记性染色体或超数染色体的来源，探讨生物种属染色体的进化与分化等问题。当然，尽管报道认为带型研究可以用来鉴定染色体，但实际上带型技术的使用也有其局限性。主要是因为：一、带型在某些染色体之间差异

7、并不显著：二、带型技术的重复性低(Benn,1992)。1．3染色体荧光原位杂交及相关技术’荧光原位杂交(fluorescenceinsituhybridization，FISH)是80年代发展起来的一种非放射性原位杂交技术，其基本原理是利用生物素、地高辛等标记DNA为探针，然后与细胞分裂中期的染色体或间期细胞核的DNA杂交(结合)，将标记的探针直接原位杂交到染色体上或DNA纤维上，再用与荧光素分子耦联的单克隆抗体与探针分子特异性结合来检测染色体上或核中与探针同源的DNA片段的位置，从而将这段DNA

8、序列定位在细胞中。FISH技术问世以来发展迅速，在其基础上发展出了可以同时区别多条染色体的多色(复合)荧光原位杂交(multiplexFISH，rnFISH)(Nederlof,1990；Speicher，1996)；高分辨率研究染色体结构、精确定位基因的DNA纤维上的荧光原位杂交(fiber-FISH)(Heng，1992；Wiegant,1992)：针对染色体鉴别和杂种鉴别的需要，以FISH技术为基础还发展起来了一些相关的研究手段，包括染色体涂染技术(whole4