海洋天然产物抗hiv作用机制和作用特点的研究及影响核糖核酸酶h活性的物质与抗hiv药物联合使用体外药效学研究

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1、硕士学位论文海洋天然产物抗HIV作用机制和作用特点的研究及影响核糖核酸酶H活性的物质与抗HIV药物联合使用体外药效学研究所院：姓名：指导教师：导师小组：学科专业：研究方向：完成日期：药物研究所李乐涛郭颖研究员郭颖彭英白金叶药理学抗病毒药理学20】4—05．18目录摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1Abstract⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．5实验材

2、料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．13实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。17实验结果一⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。331海洋来源化合物药物筛选⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯332GQQ．25作用机制和作用特点研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。343GQQ．25与HIV逆转录酶结合模式研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯37讨论一⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．42结论一⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．43实验结果二⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．484HIVRNaseH抑制剂作用机制研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．485HIVRNaseH活化剂作用机制研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．506HIV逆转录酶抑制剂联合应用的药效学⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．5l讨‘i{!}二⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．t；6总结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。67参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．68缩写对照表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．：⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．72舅【谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．75摘要逆转录酶(reversetranscriptase，RT)是HIV复制所必需的功能酶，是研发抗艾滋病药物的重要靶点。非核苷类逆转录酶抑制剂(non．nucleosidereverse．transcriptaseinhibitors，NNRTIs)是重要的抗逆转录病

5、毒药物，该类药物可结合于逆转录酶活性中心附近的疏水性口袋，该结合引起酶活性中心构象改变，进而酶活性丧失，逆转录过程被阻断。所有抗艾滋病药物经长期使用后患者体内都会产生耐药病毒，研发针对耐药HIV的药物是抗艾滋病药物研发的重点和难点。现有的5个NNRTIs具有相似的结构骨架，临床出现的耐药病毒也有多药耐药的特点，因此研发新结构骨架类型的NNRTI有可能会对耐药病毒具有较好活性。海洋物种丰富，代谢途径多样，是天然产物来源药物的重要组成，从海洋来源物质中寻找抗HIV活性物质具有重要意义。本论文应用VSVG／HIV-1重组病毒模型，从200多个海洋来源小分子化合物中

6、筛选得到活性化合物GQQ．25，ICso为8．8runol·L～。通过在HIV感染后不同时间点加入化合物检测化合物失效时间(TOA实验)确定了化合物GQQ．25作用于HIV逆转录环节；应用ELISA和荧光法测定了化合物对逆转录酶的RNA依赖DNA聚合酶活性和RNaseH活性的影响，结果显示GQQ．25可剂量依赖性抑制逆转录酶的RNA依赖DNA聚合酶活性(IC50为501amol·L-1)，对RNaseH活性无显著影响。应用耐药HIV感染细胞模型发现GQQ．25对携带RT-K103N突变的耐药毒株(HIV-1RT-K103N，HIV-IRT-L1001，K10

7、3N，HIV-1RT-K103N’v108I，HIV-IRT-K103N，G190A，andHIV-1RToKl03N，P225H)具有较好的抑制活。I生(ICso分别为7．0，23．8，13．3，14．2，6．21amol·L．1．耐药倍数分别为O．8、2．7、1．5、1．6、0．7)，而对携带RT-Y181C和RT-Y188L突变的耐药HIV活性丧失。分子对接结果显示，Lysl03不与化合物GQQ一25发生直接相互作用，而Tyrl81和Tyrl88与GQQ．25发生H．7c相互作用与疏水相互作用，该对接结果解释了GQQ一25分子作用模式。逆转录酶在逆转录

8、过程发挥了三种酶活性：以RNA为模板的DNA聚合酶活