小鼠卵巢颗粒细胞中sumo化修饰对p53功能的调控

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1、华中农业大学硕士学位论文小鼠卵巢颗粒细胞中SUMO化修饰对p53功能的调控姓名：刘晓明申请学位级别：硕士专业：动物遗传育种与繁殖指导教师：霍立军201206小鼠卵巢颗粒细胞中SUMO化修饰对p53功能的调控摘要哺乳动物卵巢中，卵泡闭锁是卵泡生长和发育过程中的自发性退化过程。经研究表明，卵泡闭锁主要是由颗粒细胞凋亡引起，与细胞凋亡相关的基因有很多已经被鉴定，如p53基因，正常细胞中p53蛋白半衰期很短，当细胞面临各种外界刺激时，p53蛋白经过不同的翻译后修饰而稳定；有研究表明人p53蛋白能够被SUMO化修饰，该修饰使p53蛋白稳定性增强，但对其活性的影响还有争议；此外，

2、关于p53与小鼠卵巢颗粒细胞凋亡之间具体关系的研究还较少。本研究的主要目的是揭示小鼠卵巢颗粒细胞中p53能否被SUMO化修饰、该修饰对p53的影响是否参与p53的功能调控。实验设计和结果如下：本课题利用小鼠卵巢颗粒细胞体外培养模型，通过p53、SllmO．1和ubc9真核表达质粒单独转染或共转染颗粒细胞的方法，揭示p53的SUMO化修饰模式，确定p53的SUMO化结合位点以及SUMO化修饰对p53稳定性和定位的影响。通过检测p53的SUMO化修饰对其生物活性的影响，包括对颗粒细胞增殖、凋亡及增殖和凋亡相关基因的表达，初步揭示p53的SUMO化修饰及；患对颗粒细胞的细胞

3、增殖和凋亡调控的影响。实验结果表明：(1)p53b蛋白能够被SUMO．1修饰，通过p53b和潜在SUMO化位点突变的p53b真核表达质粒分别与sumo．1真核表达质粒共转染的方法，鉴定了p53b的SUMO．1结合位点为lys375：(2)通过递增剂量sllmo．1真核表达质粒和固定剂量p53b真核表达质粒共转染颗粒细胞发现p53b蛋白经SUMO．1修饰后呈剂量依赖性增强其稳定性，并且SUMO．1修饰能够影响p53的定位；(3)另外，突变p53b的SUMO化位点，能够显著降低其促颗粒细胞凋亡的能力，同时对其增殖水平影响不显著；(4)过表达p53b显著下调了CHKl基因表

4、达水平，同时显著上调PCNA和Bax基因表达水平，突变p53b的SUMO化位点，对CHKl和PCNA的表达水平无影响，但却显著降低了Bax的表达水平，揭示了p53对颗粒细胞增殖调控可能是通过负调控CHKl实现的，同时其SUMO．1修饰可能不参与其促细胞增殖调控过程，相反SUMO．1修饰参与p53b调控的促颗粒细胞凋亡过程。总之，本研究发现小鼠卵巢颗粒细胞内p53b的SUMO化修饰参与p53b功能华中农业大堂圣!!三旦堡主堕壅生堂垡笙塞．一————————————————————————一的调控，该研究结果将为更好的理解卵泡颗粒细胞发育，卵泡闭锁，卵巢癌机制研究等提供理

5、论依据，为人类生殖健康以及家畜遗传育种和繁殖提供理论研究基础。关键词：小鼠；颗粒细胞；细胞凋亡；p53；SUMO化AbstractFollicularatresiaisaprocessofspontaneousdegradationof：folliclesthushinderingitsgrowthanddevelopmentinmammalianovary．Presentstudyshowsthatfollicularatresiaiscausedbyapoptosisofgranulosecellsforwhichanumherofapoptosis．relate

6、dgeneshasalreadybeenidentified，includingp53gene．Thehalf-lifeofthep53proteininnormalcellsisincreasedwhentheyareexposedtovariouskindsofexternalstimuli．Thesestimuliinfluencesthepost—translationaleventsandhencethestabilityoft11eproteins．StudiesshowthatSUMOenhancesthestabilityofp53proteinbut

7、itsactivityisnotclearSOfar．Besidesthis，littleisknownabouttheroleofp53inapoptosisofmousegranulosacells．Themainobjectiveofthisstudyistoexploretheroleofp53inmousegranulosacellsandtheeffectsofSUMOylation．Theexperimentaldesignforthisstudyandtherespectiveresultsarebrieflydiscussedbel