β-arrestin对血管收缩功能及缺血性脑卒中的影响

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1、第●——●●———●军医大学硕士学位论文13-Arrestin对血管收缩功能及缺血性脑卒中的影响Effectsof13-ArrestinonVascularFunctionandIschemicStroke研究生：导!J币IJ：寸5JI：协助指导：专业名称：培养单位：魏凯缪朝玉教授管云枫高级实验师药理学第二军医大学药理学教研室一国家973计划课题(2009CB521902)国家重大新药创制科技专项(2009ZX09303—002)二。一三年五月独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工

2、作。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。本人承担本声明的法律责任。学位论文作者签名：瑰锄U日期：小B年胡夕日学位论文版权使用授权声明本人完全了解第二军医大学有关保留、使用学位论文的规定，第二军医大学有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权第二军医大学可以将学位论文全文或部分内容编入《中国学位论文全文数据库》、《中国优秀博硕士学位论文全文数据库

3、》等数据库进行检索。可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：杰鬼翱一j导师签名：彩≯认日期：户侈年厂月夕日日期：年月日目录摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文缩略词表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·1／日lJ舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯’第一部分：13-Arrestin的表达以及基因敲除

4、小鼠的鉴定⋯⋯⋯⋯··10材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一11结果和讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一17第二部分：13-Arrestin对小鼠血管收缩功能的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．22材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯”23结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·26讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·28第三部分：13-Arrestin对小鼠缺血性脑卒中的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯·‘30材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··3

5、1结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·34讨{念⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯40全文总结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·42参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·43综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯48附录：在读期间发表文章、获奖情况⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯63致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·7313-arrestin对血管收宿功能及缺血性脑卒中的影响摘要【目的】本课题利用基因

6、敲除小鼠研究13-Arrestin在血管和大脑中的作用。课题分为三个部分：第一部分是13-Arrestin的表达以及基因敲除小鼠的鉴定；第二部分是13-Arrestin对小鼠血管收缩功能的影响；第三部分是[3-Arrestin对小鼠缺血性脑卒中的影响。【方法】第一部分：13-Arrestin的表达以及基因敲除小鼠的鉴定。按要求分别将引入的13-Arrestinl和13-Arrestin2杂合子种鼠分别交配后大量繁殖。待幼鼠4周大时，[3-Arrestinl小鼠提取尾巴DNA、测定DNA浓度后做realtime

7、．PCR鉴定基因型；13-Arrestin2小鼠的尾巴DNA直接做PCR鉴定基因型。取8．12周大的C57BL6小鼠以及不同基因型小鼠麻醉处死后，迅速取胸主动脉、心脏和大脑，组织经过匀浆、蛋白浓度测定，然后做Westernblot，分析[3-An'estinl和13-Arrestin2蛋白在上述三种组织的表达情况。第二部分：13-Arrestin对小鼠血管收缩功能的影响。该部分主要研究13-Arrestinl或13-Arrestin2敲除小鼠的胸主动脉收缩舒张功能的改变。取8—12周大的不同基因型(野生型、杂

8、合子和纯合子)敲除小鼠，脱臼处死后取胸主动脉，迅速去掉血管外膜和内皮，每条胸主动脉可切成2条5mm的血管环，在离体血管灌流系统内稳定后，分别给予新福林(Phe)、血管紧张素II(AngII)的刺激，考察其收缩反应。第三部分：[3-Arrestin对小鼠缺血性脑卒中的影响。该部分主要研究分别敲除两种13-Arrestin对小鼠大脑永久缺血后的影响。取8．12周大的三种基因型(野生型、杂合子和纯合子)敲