裂殖酵母sod2基因的克隆和转基因拟南芥的培育

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1、山东师范大学硕士学位论文裂殖酵母SOD2基因的克隆和转基因拟南芥的培育姓名：任仲海申请学位级别：硕士专业：发育生物学指导教师：张慧2001.5.1裂殖醉母SOD2签因的克隆和转荃因拟南芥的培育裂殖酵母S002基因的克隆及转基因拟南芥的培育摘要盐胁迫下，植物细胞离子均衡受到破坏，尤其是胞质中过多的Na'，对植物细胞的代谢产生毒害.植物细胞为适应胁迫环境，一方面积累可溶性有机物质;另一方面，尤其是盐生植物则通过Na'排除或者区隔化、并调整K'/Na'比率的机制来消除Na的毒害。甜土植物拟南芥胞内离子区隔化控制基

2、因AtNHXl及Na排除的基因SOS]均已克隆，并且AtNHX]在拟南芥中的过量表达显著提高了转基因植株的耐盐性，开创了降低Na毒害的基因操作新途径.502在裂殖酵母中是控制Na*}9卜流的基因，对于保持裂殖酵母细胞的离子均衡非常重要.SOD2基因在拟南芥中的过量表达，对于细胞离子均衡可能具有重要意义。，扮一丫一‘本实验采用RT-PCR方法，扩增得到了裂殖酵母.SOD2基因，将其克隆并进行序列分析，结果与国外报道的序列有四个碱基的差异.SOD2基因cDNA全长1404bp，编码一个约51kD的蛋白。将SOD

3、2基因构建到植物表达载体pROK2中，导入农杆菌后，由渗透法进行植物遗传转化，并利用PCR进行了转基因植株的分子检测。关键“’SOD2基因，(Na'/努向”运蛋白，植物耐“性，基因工程蕊、、、ii_赢裂殖醉母SOD2墓因的克隆和转墓因拟南芥的培育CloningofSOD2andgeneengineeringforsalt-tolerantArabidopsisthalianaAbstractWhenplantsareexposedtosalinity,theions,typicallyNa+reduceth

4、eapoplasticwaterpotentialandaccumulatesexcessivelyinthecytoplasm.PlantcelladaptstothesaltstressthroughaccumulationofosmoticsolutesandionhomeostasismodulationbycompartmentalizingNa'invacuoleoractivatingtheefluxsystemofNa+.AtNHXIencodingavacuolarNa'/H+antipo

5、rterandSOS]encodingaplasmamembraneNa`/H+antiporterwereisolatedfromglycophyteArabidopsisthaliana，andoverexpressionofAtNHXIinArabidopsisthalianaincreasesthesalttoleranceoftransgenicplantssignificantly.GeneengineeringbasedonreducingNa+toxicitycreatsanewapproa

6、chtoplantsalt-tolerance.SOD2fromSchizosaccharomycespomberesponsestoefluxofNa+anditisanimportantgenerelatingtohomeostasis.Thus.overexpressionofSOD2inArabidopsisthalianamaybeattributetotheionhomeostasisinthecell.TheSOD2genewasisolatedfromSchizosaccharomycesp

7、ombebyRT-PCRstrategyandconfirmedbysequencing.Butdiferencewasfoundatfourbasesofthesequencefromthepreviousreports.ThecDNAofSOD2encodesaproteinofabout51KDandcomposedof1404bp.Then,aintegratedvectorofSOD2andNpt11ofpROK2plasmidwasconstructedandintroducedintoArab

8、idopsisthalianabyinplantatransformationmethodmediatedbyAgrobacteriumtumefaciens.Transformantswerescreenedbytheirabilityofgrowingonmediacontainingkanamycin.ThegenetransformationwasconfirmedbyPCRanalysis.Keywor