芦荟有效成分的提取及鉴定

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1、第21分会场生物技术产业化465一一=========2==#==；===％==；====；=≮=========；==#========一通讯作者杨洁，女，副教授，硕士研究生导师，新疆大学生命科学与技术学院。电话：0991—8583053。13139884225；E—mail：yangjie234@hotmail．corn。芦荟有效成分的提取及鉴定钟俐1刘菲2支殷31．新疆大学生命科学与技术学院生化教研室，乌鲁木齐，830046；2．新疆大学生命科学与技术学院生技01—3班，乌鲁木齐，830046摘要采用醇浸法和超声波法结合提取库拉索芦荟中的多糖和甙类物质。通过影响因子的正交实验确定醇浸法

2、提取的最佳条件为：提取温度70℃，浸提时间3h，pH6，乙醇倍数为9倍。用苯酚一硫酸改进法进行芦荟多糖的鉴定并计算多糖的含量。使用乙酸镁一乙醇溶液，NaOH溶液和溴水三种方法鉴定芦荟中的甙类物质。实验结果表明采用传统化学方法提取、鉴定芦荟中的多糖和甙类物质简单，快捷，可信度高，重现性好，对芦荟多糖含量的测定较为准确。传统化学方法和超声波法结合可有效的提高提取速度。关键词生物工程芦荟芦荟多糖分光光度法引言芦荟是百合科多年生多肉质常绿草本植物。芦荟属植物含有多种药用成分，其中主要是多糖和甙类物质。近年来的药理和临床试验表明芦荟可被用于治疗灼伤、便秘、胃肠等疾病，具有抗肿瘤、抗辐射、抗病毒、抗真菌

3、、促进伤口愈合等功效。芦荟多糖和芦荟甙是芦荟的主要生物活性组分，其含量是芦荟制品的重要理化检验指标之一。一、实验材料(一)实验材料库拉索芦荟购自北园春花卉市场，采自南山芦荟养殖基地。(二)主要试剂95％乙醇，无水乙醇，乙醚，浓硫酸(分析纯试剂)，醋酸镁(分析纯试剂)，NaOH，HCI，NaOH(分析纯试剂)，唾液淀粉酶(分析纯试剂)，浓溴水，苯酚。二、实验方法(一)芦荟多糖的提取取新鲜库拉索芦荟叶片，用蒸馏水清洗，切小块，捣碎后倒入量筒中，按1：1(口／u)加入蒸馏水；置于大烧杯中放入超声波细胞破碎仪中进行破碎，(破碎时间3s，间隙时间3s，工作次数45次)；在一定pH466以科学发展观促进

4、科技创新(。F)一——————————————————————————————————————————一值，一定温度下水浴一段时间；5000r]min离心10min；过滤，滤液中按一定体积比加入95％乙醇，搅拌；5000r／min离心10min；弃上清液，沉淀用95％乙醇洗涤3次，抽滤干燥得到芦荟多糖。1．影响因子的正交实验在芦荟多糖的提取过程中，有许多因素会影响到所提出的芦荟多糖的量。本实验选用了四个主要的影响因素，每个因素设置了三个水平。所设置的因素为：芦荟原汁水浴温度，水浴时间，芦荟原汁的pH，原汁中加乙醇的倍数。水平的设置如下表1。表1正交实验的因素水平设置据此方法进行正交实验。2．

5、传统工艺与超声波法提取的比较由于芦荟多糖存在于叶肉薄壁细胞内，细胞膜或细胞壁破碎与否、破碎程度成为提取芦荟多糖的关键性问题。超声波是频率高于20kHz的机械波，它在媒介中传播时可产生空化现象，空化中产生的极大压力造成被破碎物在瞬间破碎，同时，超声波产生的振动作用加强了被破碎物的扩散及溶解。因此，在提取细胞内物质的过程中可用超声波进行细胞破壁。两种方法的比较：在提取温度70℃，浸提时间3h，pH6，乙醇倍数为9倍的条件下，分别用传统方法和超声波法提取芦荟多糖，并在不同的提取时间测多糖的产率。3．芦荟多糖的鉴定对芦荟多糖的鉴定利用改进的苯酚一硫酸法。苯嘞一硫酸试剂能与芦荟多糖中的己糖起显色反应，

6、在一定波长下其吸光度的变化与多糖含量呈线性关系。采用苯酚一硫酸显色法鉴定芦荟多糖，芦荟中的多糖在硫酸的作用下，先水解成单糖，并迅速脱水生成糠醛衍生物，然后和苯酚缩合成有色化合物共轭酚在490nm处有最大波长，由此可以鉴定出芦荟中的多糖(图1)。苯酚水浴加热后溶解，称取1009，加铝片0．1019(先用1：6的盐酸除去铝片表面的氧化铝后再称量使用)，加氢氧化钠0．059，蒸馏收集182"(2的馏分。取馏出液10．09，加水150mL，置于棕色瓶中，备用。第21分会场生物技术产业化467=一：————————；———————————————————————————————##HOH己糖c≮一徊一

7、瓣长甲醇糠醛图1芦荟多糖与苯酚一硫酸的反应葡萄糖标准溶液：取适量葡萄糖(分析纯试剂)于烘箱(105℃)内烘干之恒重，精确称取103．8mg，加蒸馏水溶解，定容至100mL(定容前加5滴甲苯防腐)。即可得到浓度为1．038mg／mL的葡萄糖标准溶液。精确吸取葡萄糖标准液0．05mL，0．10mL，0．20mL，0．30mL，0．40mL，0．50mL，分别置试管中，滴加蒸馏水至10mL。吸取上述溶液各2．00m