大黄素对胃癌prl-3表达与下游akt、bcl-2家族调控作用及机理研究

《大黄素对胃癌prl-3表达与下游akt、bcl-2家族调控作用及机理研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、孙振华：大黄素对胃癌PRL一3表达与下游AKT、Bcl一2家族调控作用及机理研究中文摘要目的和意义：胃癌是占世界高发肿瘤的第二位，占我国高发性消化道肿瘤的第一位，且发生率呈逐年上升的趋势，己成为威胁人类健康的主要杀手。单一的治疗方法往往难以取得好的疗效。如何针对患病个体实施综合性的治疗策略，一直为广大肿瘤研究学者所关注。中药治疗肿瘤，具有疗效确切、副作用少，有着其它治疗方法无可比拟的优势。随着当代医学特别是医学分子生物学的进展，抑癌中药抗肿瘤的分子机制逐渐被一一揭示，这使中药的现代化及世界化成为可能。我国的药用植物资源丰富，中药的抗肿瘤活性已得到国际所公认。据统计，我国当前已对

2、药用植物中28个科(属)，3000多种以上中草药进行了抗癌筛选，其中含有抗癌活性成分的中草药约有200种左右。常见抑癌中药种类有清热解毒类中药、活血化瘀类中药、软坚散结类中药、化湿利水类、扶正类中药等。现代研究发现常见抑癌机制有：(1)诱导肿瘤细胞凋亡；(2)抑制肿瘤血管的生成；(3)调控癌基因的表达；(4)提高机体免疫功能，下调免疫抑制分子并影响其免疫抑制效应的发挥；(5)逆转肿瘤的多药耐药性等。依据抑癌中药的作用机制及作用靶点，有的放夭的去治疗肿瘤，也为肿瘤的治疗开拓了新的思路。大黄素(1’3’8一三羟基一6一甲基葸醌)，是蓼科植物虎杖的干燥根茎和根。其除了具有抗菌、止咳、

3、降血压作用外，还有着抗肿瘤作用。但其抗肿瘤机制研究不够深入。我们研究了大黄素对人胃腺癌SGC．7901细胞株细胞抑制及凋亡、PRL．3癌基因表达调控的影响；WangH等人通过研究发现，PRL．3可以作为P13K／AKT通路的上游调节分子，并在肿瘤转移、上皮一间质转化中发挥重要的作用。我们继续探讨了大黄素对胃腺癌SGC-7901细胞P13K／AKT信号转导的影响，分析了其发挥抑癌作用的可能分子机制。方法：1、取对数生长期的SGC．7901细胞，胰蛋白酶消化后，以5×105／rrd接种于96孔培养板。细胞贴壁后，更换含大黄素培养基，使得实验组含不同浓度大黄素，对照组加等量培养基，内

4、含与最高浓度组等量的DMSO；每个浓度设8个复孔。置5％C02培养箱内分别培养24、48、72h后，每孔加入20“l浓度为5mg／ml的MTT。继续培养4h后弃全部上清夜，每孔加DMSO200pl，379C震荡孵育10rain。用酶标仪检测A570nm的OD值，计算细胞存活率及大黄素对细胞增殖的抑制率，实验重复3次。2、将不同浓度的大黄素作用于体外培养的SGC．7901细胞24小时后，胰蛋白酶消化，PBS离，tl,洗涤收集，稀释至106／ml，以PBS重悬细胞，与适当比例的吖啶橙／溴化乙啶荧光扬州大学博士学位论文染液混合，在荧光显微镜下观察细胞凋亡形态并分别计数早期非凋亡的坏死

5、细胞、活细胞，统计肿瘤细胞的凋亡率。㈣IIMillIllIIHIIIIIIIIIUl一2Y2258582一凋亡细胞、晚期凋亡细胞、3、将不同浓度的大黄素作用于体外培养的SGC，7901细胞24小时后，胰蛋白酶消化，调整待侧细胞的密度为5×105-1×106个／ml，PBS洗涤，将细胞重悬于200“l结合缓冲液，加入适当比例的Annexin．V．FITC和PI，混匀室温反应15min后流式细胞仪检测早期凋亡细胞率。4、利用实时荧光定量PCR仪，分析52例胃癌患者肿瘤组织及配对癌旁组织标本中的PRL．3mRNA表达情况，了解PRL．3mRNA在胃癌肿瘤组织及癌旁组织中的表达差异。5

6、、利用免疫印迹技术，分析52例胃癌患者肿瘤组织及配对癌旁组织标本中的PRL．3蛋白表达情况，了解PRL．3蛋白在胃癌肿瘤组织及癌旁组织中的表达差异是否与mRNA一致。6、通过实时荧光定量PCR分析及免疫组化方法，从转录水平及翻译水平检测PILL．3、Bmi．1在胃癌中的表达，了解其表达水平与临床病理特征的关系，分析其临床意义；7、大黄素作用于胃癌SGC．7901细胞24h后，收集细胞，分别提取RNA及细胞内总蛋白，检测大黄素作用前后PRL．3mRNA及蛋白水平的变化，分析大黄素对PRL．3表达调控的影响；8、分析大黄素作用于胃癌SGC．7901细胞24h后，P13粼T通路相关蛋

7、白及其下游分子表达的变化，探讨大黄素的可能抗肿瘤机制。结果：l、MTT法检测大黄素抑制SGC．7901增殖的实验结果显示：大黄素抑制人胃癌SGC．7901细胞增殖呈时间、浓度依赖性。不同浓度大黄素作用于胃癌细胞24、48、72小时后，与对照组相比，细胞生存率显著降低(尸<0．01)；除30州浓度组与45山浓度组在24小时段相比P<0．05外，其余组闻差异明显(P<0．01)。各浓度大黄素组随着作用时间的延长，细胞生存率也显著性下降，组间比较有统计学意义(P<0．01)。2、通过AO．EB染色