发根农杆菌介导irt1基因转化镉超富集植物油菜的研究

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1、万方数据硕士学位论文发根农杆菌介导IRTl基因转化镉超富集植物油菜的研究ResearchonAgrobacteriumrhizogenes—mediatedIRIlgenetransformationinCdHypemccumulatorBrassicacampestrisL．作者：刘静轶导师：晏琼副教授北京交通大学2014年6月方人皂床‘，，，泓万方数据学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解北京交通大学有关保留、使用学位论文的规定。特授权北京交通大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检

2、索，提供阅览服务，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘。(保密的学位论文在解密后适用本授权说明)学位论文作者签名：舌f新歃签字日期：珈降年6月J6日JV：患{}名期签日．】，．师字导签万方数据学校代码：10004北京交通大学硕士学位论文发根农杆菌介导职丌基因转化镉超富集植物油菜的研究ResearchonAgrobacteriumrhizogenes—mediatedIRIlgenetransformationinCdHyperaccum

3、ulatorBrassicacampestrisL．作者姓名：刘静轶导师姓名：晏琼学位类别：理学学号：11121801职称：副教授学位级别：硕士密级：公开学科专业：生物化学与分子生物学研究方向：重金属污染植物修复北京交通大学2014年6月万方数据致谢本论文的工作是在我的导师晏琼副教授的悉心指导下完成的，晏琼副教授严谨的治学态度和科学的工作方法给了我极大的帮助和影响，让我在北京交通大学的这短短的三年时间成长了太多。在此衷心感谢晏琼老师对我的关心和指导。感谢研究院的培养，感谢各位老师无私的教导，胡红刚老师对于我

4、的科研工作和论文都提出了许多的宝贵意见，在此表示衷心的感谢。感谢江红老师在平日实验中的悉心指导，让我受益匪浅。感谢何金生老师、王字玲老师、朱运峰老师、张丽姝老师、侯玲玲老师、郑妍鹏老师、张莹老师、纪丰民老师、丁克俭老师、彭向雷老师的指导和帮助，让自己收获很多，在此表示感谢。在实验室工作及撰写论文期间，缪新燕、李纯、徐菲一、娄亮亮、张秀娟、田士军、侯雷、杨海强、戴蒙、李金龙、张妮、王楠、宋何煜、吴吴、武晓燕等同学对我论文中的相关数据和实验研究工作给予了热情帮助，在此向他们表达我的感激之情。感谢罗丹师姐、焦月盈

5、师姐在我实验细节中的帮助和关心，感谢同实验室的张耀、王鹏坤、马尧、李玮、元小宁，感谢师妹李晓丽、张腾，谢谢大家。另外也感谢我的家人，他们的理解和支持使我能够在学校专心完成我的学业。最后，向所有帮助过我的人们衷心的说句谢谢。万方数据j匕塞交通太堂亟±堂僮诠塞擅噩摘要摘要：目的：重金属镉(Cd)因其致癌性强而引起业界广泛关注，Cd可通过工业废水、废渣污染土壤和水源，并通过食物链进入到动物及人体内对生物造成不可逆的损害。随着生物技术的不断发展，利用植物进行Cd污染的修复显示出良好的应用潜力。自然界中存在可以富集C

6、d的超富集植物，能够在一定浓度的Cd污染环境中生存，并通过新陈代谢机制摄取和固定Cd。但目前已知的Cd超富集植物存在富集系数低、富集量有限等缺点，影响了实际应用。随着基因工程技术的发展，利用基因工程的手段对Cd超富集植物进行转基因改造，是促进Cd污染环境植物修复技术发展的重要途径。因此本论文选择分布广泛、易获得的Cd超富集植物油菜(BrassicacampestrisL．)进行转基因改造研究，希望通过农杆菌介导的方法建立转基因的油菜毛状根体系，今后可利用转基因毛状根体系作为Cd富集转基因改造研究平台。方法：

7、利用农杆菌介导的方法对油菜进行转基因毛状根的诱导和基因改造研究。利用油菜种子进行无菌培养获得外植体，同时将发根土壤杆菌ATCCl5834进行单克隆培养、活化，将活化好的菌液与外植体子叶外植体进行共培养，后转移至含头孢噻肟钠(Cephalosporins，Cef)的培养基上进行除菌，10d后可获得油菜毛状根。设计引物对油菜毛状根进行PCR检测，检验rolB基因是否已整合进入植物毛状根组织。同时对不同的侵染时间、不同浓度萘乙酸(NAA)对油菜毛状根诱导的影响进行分析研究。在确定油菜毛状根成功获得的基础上，利用T

8、akara公司的pRll01质粒将与Cd富集相关的侬"基因整合进ATCCl5834菌种中，并利用改造过的ATCCl5834浸染油菜子叶外植体，诱导获得转僚”基因毛状根。同样设计引物利用PCR技术进行侬丌基因、rolB基因的检验，确定坎乃基因、rolB基因已经整合植物毛状根组织的DNA中。最后对转侬刀基因毛状根进行Cd富集实验研究。将转职丌基因油菜毛状根与野生菌诱导的油菜毛状根分别置于含不同浓度Cd的培养基上进行暗