抗vegf单抗联合紫杉醇对粘液表皮样癌、腺样囊性癌影响的实验研究ppt培训课件

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1、抗VEGF单抗联合紫杉醇对粘液表皮样癌、腺样囊性癌影响的实验研究昆明医学院口腔学院研究生：姚春银导师：黎明研究背景研究目的技术路线预期成果实验内容可行性分析计划安排经费预算一、研究背景在涎腺恶性肿瘤中如腺样囊性癌、黏液表皮样癌对放疗、化疗不甚敏感，临床疗效不佳。其中粘液表皮样癌占第一位（约30%），恶性程度高，侵袭性强，常发生区域淋巴结转移，且可以发生血性转移。如何寻求新的治疗涎腺恶性肿瘤的新方法，减少涎腺恶性肿瘤的转移和复发，是口腔颌面外科临床工作者面临的难题。随着近年对血管内皮生长因子（Vascul

2、arendothelialgrowthfactor,VEGF)及紫杉醇研究的深入，发现抗VEGF单克隆抗体及紫杉醇对恶性肿瘤有明显的疗效，为涎腺恶性肿瘤的治疗提供了新思路。VEGF的作用特异性地与血管内皮细胞受体结合,促进内皮细胞分裂、增殖和血管构建,从而促进新生血管的生成。通过增加金属蛋白酶和间质胶原酶的表达，提高新生血管的通透性，加速肿瘤生长，并最终导致肿瘤淋巴道转移。抑制宿主抗原反应细胞的成熟，造成免疫功能的损害。VEGF单抗贝伐单抗(Bevacizumab)为一种重组人源化单克隆抗体可与VEGF

3、结合抑制VEGF与其受体的结合而发挥作用。从而达到减少肿瘤血管形成，“饿死”肿瘤的目的。市场上已有VEGF单抗与标准化疗方案联用显示了很好的疗效，但目前VEGF的作用机制尚不十分明确，其次,长期使用是否会产生不良反应,还有待进一步研究。紫杉醇作为强效的微管稳定剂，通过促进微管蛋白的聚集，干扰微管蛋白动力学和微管功能，抑制细胞分裂。紫杉醇可通过作用于细胞凋亡基因，使细胞停滞于G2/M期。间接起到放疗增敏作用。紫杉醇还可与热休克蛋白(HeatShockProteinsHSPS)结合并激活巨细胞，从而逆转肿瘤

4、引起的巨细胞的免疫抑制。抑制肿瘤血管生成二、研究目的通过粘液表皮样癌及腺样囊性癌裸鼠成瘤，观测抗VEGF单克隆抗体及紫杉醇对粘液表皮样癌和腺样囊性癌的生物学影响机制及治疗作用。寻求治疗粘液表皮样癌及腺样囊性癌的治疗方法，为临床治疗粘液表皮样癌及腺样囊性癌提供理论依据。三、技术路线组别给药类型组I生理盐水组II抗VEGF单抗组III紫杉醇组IV抗VEGF单抗+紫杉醇裸鼠种植模型计算抑瘤率TUNEL技术检测凋亡肿瘤微血管测定四、预期成果探明抗VEGF单克隆抗体及紫杉醇对粘液表皮样癌和腺样囊性癌的生物学影响机

5、制及治疗作用，并获得相关实验数据。发表文章1篇。建立动物模型观察小鼠肿瘤指标TUNEL技术检测肿瘤细胞凋亡肿瘤内部微血管的测定五、实验内容动物及细胞来源BALB/c小鼠向生物公司购买。细胞来源有两类:1.直接来自人原发肿瘤组织，由临床进行收集。2.来自于传代的细胞。Mec及本实验室的传代细胞建立动物模型BALB/c小鼠分别于右腋皮下接种粘液表皮样癌细胞及腺样囊性癌细胞。接种成功后每种肿瘤各40只小鼠（共80只）将两种小鼠各随机分为4组（共八组）。组别N（只）给药物种类剂量给药途径，时间组I10生理盐水0

6、.2mL腹腔注射，接种后第7－9天，1次/天组II10抗VEGF单抗200μg/0.2mL腹腔注射，接种后第7－9天，1次/天组III10紫杉醇0.3mg/0.2mL腹腔注射，接种后第10－12天，1次/天组IV10抗VEGF单抗+紫杉醇200μg/0.2mL抗VEGF单抗+0.3mg/0.2mL紫杉醇第7－9天注射抗VEGF单抗，接种后第10－12天注射紫杉醇，余同上观察小鼠肿瘤指标1.当肿瘤可触及，肿瘤旁边置5㎜不锈钢消毒标尺后采集图像，1次/2天，用ImageProPlus6.0(IPP6.0)图

7、像分析软件测出肿瘤的短径和长径，根据体积计算方法＝（短径2×长径2)×0.5，取平均值描绘肿瘤生长曲线。2.　　处死裸鼠,剥离肿瘤称质量，根据以下公式计算抑瘤率。生理盐水组平均瘤重（㎎）－实验组平均瘤重（㎎）抑瘤率(%)=×100%.生理盐水组平均瘤重（㎎）TUNEL技术检测肿瘤细胞凋亡石蜡切片脱蜡、水化阻断内源性过氧化物酶暴露、修复抗原显色，复染，脱水，透明，封片。光镜观察，采集图像。IPP6.0处死小鼠切除肿瘤肿瘤内部微血管的测定石蜡切片脱蜡、水化CD31染色、标记肿瘤内部血管计数热区内的微血管数。

8、IPP6.0处死小鼠切除肿瘤显色，复染，脱水，透明，封片。选择血管生成热区（hotspot）通过MVC得到微血管的密度六、可行性分析1.技术力量保障：实验技术问题有实验室老师指导进行，本实验所涉及的实验方法和实验技术在国内外均是成熟可靠的。2.硬件设施：口腔实验室拥有本实验所需的科研仪器设备，所需动物、试剂等国内外均可购得。七、计划安排：2013年4月-6月：实验准备阶段（收集临床标本、订购实验材料、动物、试剂等）2013年6月-2013年