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时间:2019-02-25
《vegf-b基因靶向sirna对肝癌细胞裸鼠皮下种植瘤的影响》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯l英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3研究论文VEGF—B基因靶向siRNA对肝癌细胞裸鼠皮下种植瘤的影响前沿⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯15附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯16附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯22讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯24结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯
2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯27参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯28综述血管内皮生长因子家族及小干扰RNA与原发性肝癌的研究进展31致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯43个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯44中文摘要VEGF.B基因靶向siRNA对肝癌细胞裸鼠皮下种植瘤的影响摘要目的:原发性肝癌(简称肝癌)是我国常见的消化系统恶性肿瘤之一,起病隐匿、恶性程度高、进展迅速,多数患者在症状出现时已处于中晚期而错失手术机会,手术治疗仍是治疗肝癌的首选方法,但多数患者在术后2年内出现肿瘤复发,术后肿瘤转移和复发已成为影响肝癌患者能否
3、长期生存的主要问题,而肿瘤血管新生是肿瘤生长和转移的主要原因。血管内皮生长因子家族(vascularendothelialgrowthfacterfamilymembers,VEGFs)在血管新生过程中起关键作用。作为VEGF家族成员之一的VEGF.B在肝癌进展过程中呈现高表达状态,并影响肝癌患者的预后。因此抑制VEGF.B基因表达有望成为治疗肝癌的一种新手段。RNA干扰(RNAinterference,RNAi)是通过一定途径将与内源性mRNA编码区同源的双链RNA(doublestrandedRNA,dsRNA)导入细胞内,致该mRNA发生降解而产生基因表达沉默的效果。其中小干扰RNA
4、(smallinterferenceRNA,siRNA)是RNAi的主要效应分子,是由20多个核苷酸组成的小片段dsRNA分子。以质粒或者病毒为载体将靶向基因siRNA导入细胞,并对特定基因产生沉默。本研究利用RNAi技术,设计针对VEGF—B基因的siRNA,转染肝癌细胞株HepG2细胞,通过建立裸鼠皮下种植瘤模型,观察实验组与对照组种植瘤的生长情况,并应用免疫组织化学染色法检测各组VEGF—B蛋白表达情况。方法:利用RNAi技术,将体外合成的VEGF.B基因靶向siRNA转染入人肝癌细胞株HepG2细胞,分别建立阴性组(对照组)EgO以及三个阳性组(实验组)Egl、E92、E93。用B
5、lasticidin稳定筛选后,进行培养扩增,最后共得到四组HepG2细胞:三组VEGF.B基因靶向siRNA阳性质粒转染组(Egl、E92、E93)、阴性对照空载质粒转染坌g(E90)。然后分别接种于4组裸鼠皮下(每组6只,随机分配),建立人肝癌细胞裸鼠皮下种植瘤模型,即Ec0组、Ecl组、Ec2组、Ec3组。定期观察裸鼠皮下种植瘤的生长情况,30天后处死裸鼠,对比测量4组裸鼠皮下种植瘤的体积、重量,并用免疫组织化学染色法检测分析VEGF。B蛋白的表达。采中文摘要用Image.ProPlus6.0图像分析系统进行相对定量分析,计算每个视野的单位面积内阳性染色积分光密度值(IOD),取其均
6、值进行统计分析。.结果:1以含荧光标记的质粒为载体,成功将VEGF—B基因靶向siRNA转染入人肝癌细胞HepG2细胞,48小时后转染效率均达60~70%。224只裸鼠皮下均成瘤,3个实验组裸鼠皮下种植瘤平均生长速度较对照组缓慢,30天后种植瘤体积对照组为:(1.698+0.137)cm3,实验组分别为(1.107+0.355)cm3、(1.229+0.099)cm3、(1.162+0.188)cm3,瘤体重量对照组为:(1.068+0.086)g,实验组分别为:(O.696士0.224)g、(O.772+0.062)g、(O.730+0.1l8)g。3个实验组种植瘤体积及重量均显著小于对
7、照组(尸
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