vegf、enos的变化与肾间质纤维化的关系

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1、徐州医学院硕士学位论文前言慢性肾脏疾病(Chronickidneydisease，Cr,D)是一种常见的慢性非传染性疾病，其发病率在全球范围内随着衰老人群以及糖尿病、肥胖和高血压患病人数的增加而进一步升高，已成为全球重视的公共健康问题。慢性肾脏疾病发展至终末期时需要进行肾脏替代治疗，此时不仅医疗花费高，还会发生诸多并发症，严重影响患者生活质量，给社会及家庭带来沉重的经济和生活负担。因此，积极探索慢性肾脏病的发病机制，有着极其重要的医学价值和社会意义。肾脏纤维化包括肾小球硬化和间质纤维化，是所有慢性肾脏疾病发展的最终结果，导致终末期肾功能衰竭的主要原因之一。目前，国

2、内外很多研究都认为，肾小管上皮细胞的凋亡、肾间质炎性细胞的浸润、肌成纤维细胞的聚集，并在一些促纤维化因子的参与下，使细胞外基质生成增多、降解减少，而产生肾间质纤维化，导致肾功能严重受损。但是，微血管损伤在肾脏疾病中的作用很少被重视。肾脏微血管主要是指源于出球小动脉并分布于肾小管周围的毛细血管网，即肾小管周围毛细血管(peritubularcapillaries，PTC)，后者对维持肾小管正常的结构与功能起关键作用。Kang等【10，31在单侧输尿管梗阻(unilateralureteralocclusion．UUO)、5／6肾切除、糖尿病肾病等模型鼠的研究发现，在

3、肾脏进行性损伤过程中，均存在肾小管周围血管病变，且肾小管周围血管的减少程度与肾间质纤维化程度高度正相关，并认为微血管病变是肾脏疾病进展为肾纤维化的早期事件之一，而非纤维化的一个附带现象。孙东等H1在慢性马兜铃酸肾病的研究中发现，肾小管周围血管损伤是引起马兜铃酸肾病肾间质纤维化的重要原因。因此，肾脏微血管损伤是引起肾小球硬化和肾间质纤维化的关键因素之一。血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)属多潜能细胞因子家族中的一员，作用于血管生成的起始，促使原始血管网形成。大量研究表明VEGF与受体结合后，具有促进内皮细胞增

4、殖、促新血管生长、增加血管通透性、6，．．■『，0◆徐州医学院硕士学位论文血管维持作用、细胞质聚钙作用、增加单核细胞趋化性并能活化蛋白酶等作用【51。VEGF是残余肾的肾小球和小管肥大以及内皮细胞增殖的必要条件，下调VEGF会导致肾小球硬化和小管间质纤维化的发生【6～。内皮源性一氧化氮合酶(endothelialnitricoxidesynthase，eNOS)主要表达于血管内皮细胞、血小板、肾小管上皮细胞及一些能持续产生少量一氧化氮(nitricoxide，NO)的其他类型细胞中的单氧化酶【8J，可以催化L-精氨酸代谢产生内皮源性舒张因子一氧化氮，在调节血管稳态

5、中发挥着十分重要的作用【91。eNOS在血管新生中也具有关键作用【10,11,12】。eNOS基因敲除的大鼠组织缺血后血管新生功能不良；eNOS缺陷的大鼠肢体缺血模型血管新生功能下降；eNOS缺陷的大鼠心肌梗死后血管新生功能减弱【11,13,141。微血管损伤是肾脏纤维化的关键因素之一，VEGF和eNOS在血管新生及血管维持中起着关键作用，我们推测VEGF和eNOS变化对肾脏纤维化起到一定的影响。UUO模型是研究肾小管萎缩和间质纤维化的经典模型，为此，本研究将以UUO小鼠模型为研究对象，观察VEGF、eNOS在UUO模型肾间质纤维化中的变化，探讨其与肾间质纤维化的

6、关系。7，k■F，一◆徐州医学院硕士学位论文材料和方法l材料1．1试剂：抗CD34兔多克隆抗体抗VEGF小鼠单克隆抗体抗HIF．1a兔多克隆抗体抗eNOS兔多克隆抗体抗CTGF兔多克隆抗体抗争actin兔多克隆抗体PV-6001兔二步法检测试剂盒PV-6002鼠二步法检测试剂盒DAB显色试剂盒Masson染色试剂盒碱性磷酸酶标记的羊抗兔／马抗小鼠抗体NBT／NCIP显色试剂盒RIPA裂解液PBS枸橼酸盐缓冲盐溶液1．2主要仪器：Olympus显微镜2．5pl、20Ill、200山、1000山微量移液器PHS．3C精密PH计FAl004型微量电子天平370C孵箱武汉

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