外源性neuroglobin神经保护机制初探

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1、复旦大学硕士学位论义摘要中文摘要外源性Neuroglobin神经保护机制初探第一部分外源性Ngh保护低氧缺血海马神经元损伤的在体观察一低氧小鼠模型的建立目的:研究低氧处理对小鼠海马神经元的损伤，及外源性Ngh对低氧所致小鼠海马神经元损伤的保护作用。方法:使用小鼠专用低氧箱，给予小鼠8%氧气6h。同时设置常氧组小鼠作为对照。Ngh不同干预组小鼠于低氧复氧即刻起腹腔分别注射重组人源Ngh(B，17KD)及其改构体(A，20.3KD;E，18KD)sm留kg.d，连续3天，‘常氧及低氧对照组分别给予相同体积的生理盐水。常氧下复氧72h后采用N

2、euN免疫染色检测不同干预组小鼠海马神经元丢失情况。结果:免疫组化染色结果显示，小鼠在8%氧气6h，然后常氧下复氧72h后，低氧对照组小鼠海马CAI和CAZ区神经元丢失明显，重组Ngh及其改构体组海马cAI和cAZ区神经元丢失均较低氧对照组明显减少有统计学意义。结论:小鼠低氧6h复氧72h将严重损伤海马神经元，外源性给予Ngb可以有效减少海马神经元丢失。二.缺血小鼠模型的建立目的:研究缺血处理对小鼠海马神经元的损伤，及外源性Ngh对缺血所致海马损伤的保护作用。方法:双侧颈总动脉结扎巧分钟制备全脑缺血模型。假手术组小鼠经历相同的过程但不夹

3、闭颈总动脉，作为对照组。Ngh不同干预组小鼠于缺血再灌注即刻开始分别腹腔注射外源性Ngh及其改构体smg/kg.d，连续3天，假手术组和手术对照组分别给予相同体积的生理盐水。脑血流再灌注72h后采用NeuN染色检测不同干预组小鼠海马神经元丢失情况。结果:小鼠缺血再灌注72h后，手术对照组海马cAI和cAZ区神经元较假手术组明显丢失，但给予Ngh干预后海马CAI和CAZ区神经元丢失较手术对照组明显减少。结论:缺血再灌注可以使海马神经元丢失，但外源性给予Ngh干预后可以有效减少海马神经元的丢失。级旦大学硕士学位论久摘要三.外源性Ngh对低氧

4、缺血小鼠神经营养因子的影响目的:探索Ngh对低氧或脑缺血小鼠脑内神经营养因子的影响以及对星形胶质细胞的作用。方法:用半定量RT-PcR分析各组小鼠脑匀浆中G一CSF、BDNF、GDNF、CNTF等神经营养因子mRNA的表达情况，之后用ELISA法测定G一CSF蛋白水平。同时采用GFAP染色检测海马DG区星形胶质细胞的激活情况。结果:低氧复氧及脑缺血再灌注可以促进多种神经营养因子mRNA表达，Ngb干预后G一CSF、BDNF、GDNF、CNTFmRNA表达进一步增加;在蛋白水平层面，脑组织中G一CSF的量在Ngh组较对照组明显增多;同时发

5、现Ngh组海马DG区GFAP染色阳性细胞数较对照组也有明显增多。结论:Ngh可以增加低氧或脑缺血后G一CSF、BDNF、GDNF、CNTFmRNA和G一CSF蛋白水平的表达，同时可以激活DG区的星形胶质细胞。第二部分外源性Ngh对缺血缺氧损伤保护作用的离体研究外源性Ngh对神经元的作用目的:观察体外培养的神经元在正常培养条件下，Ngh促细胞增殖和刺激G一CSF分泌的作用;以及在oGD模型上观察Ngh的抗凋亡和促进G一csF分泌的作用。方法:在正常培养条件下，采用MTT法测定不同Ngh在不同浓度下干预神经元24h、48h和72h后的细胞增

6、殖率，同时用ELISA法测定细胞上清液中G一CSF的含量;在OGD模型上，采用LDH和MTT法测定OGD3h后复氧oh、3h、6h、1Zh、24h各组细胞死亡和生存情况，以ELISA法测定同一时间点上细胞上清液中G一CSF的水平。结果:正常培养条件下，神经元在Ngh干预24h、48h、72h后细胞增殖率均较同一时间点的对照组有所增加，而且在干预48h达到高峰，在这一时间点上细胞上清液中的G-csF含量也较对照组增加，其中Ngh高浓度组G一csF含量增加最为明显;在oGD模型上，LDH测定验证oGD3h后复氧1Zh、24h后Ngh干预组死

7、亡率较对照组明显下降，同时MTT法也证实oGD3h复氧12h、24h后Ngh干预组细胞生存率较对照组明显升高，其中在复氧24h效果更佳。OGD3h复氧24h后，Ngh不同浓度的干预组上清中G一CsF含量均比对照组高，而且Ngh高浓度组G一cSF含量增加最为明显。结论:Ngh可以促进神经元的增殖，同时可减轻oGD所致细胞损伤，提高神经元生存率，在oGD及正常培养条件下，Ngh可以促使神经元分泌G一csF增加。羲旦大学硕士学位论灰摘要二.外源性Ngh对星形胶质细胞的作用目的:观察体外培养的星形胶质细胞在正常培养条件下，Ngh刺激G一CSF分

8、泌的作用;以及在oGD模型上观察Ngh的抗凋亡和促进G一csF分泌的作用。方法:在正常培养条件下，采用ELlsA法测定不同结构Ngb在不同浓度下干预星形胶质细胞24h、48h和72h后细胞上清液中G一CSF